冰冻切片的免疫荧光(共5页).doc

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资源描述

精选优质文档-倾情为你奉上免疫荧光通用操作规程冰冻切片的免疫荧光1,动物组织直接OCT包埋,或灌流后的组织30%蔗糖溶液4过夜后,OCT包埋。-20保存3月,-80长期保存。请勿保存于液氮。2,冰冻切片机切片至少10um,空气干燥2分钟后,-20储存3,切片从-20取出后,在通风橱放10-30分钟以去除水汽,4%PFA固定15分钟,或-20丙酮固定15分钟置通风橱2小时4, 1XPBS清洗玻片,3X5min 从此请保持玻片湿润5,有时,抗原修复3小时会得到更好的结果。为此请:选用稳定的抗原修复方式(真空负压.微波修复.高压修复.隔水加热.电炉加热)关注修复的温度 ,时间 (抗原修复时在有效的温度范围内所持续的时间),抗原修复液必须遵循自然降温规律,使用足量的抗原修复液选择不同PH值的修复液( A液 枸盐酸缓冲液 PH6.0, B液 EDTA-Na缓冲液 PH8.0, C液 枸盐酸缓冲液 PH4.5)6,室温封闭1小时 封闭液:5%BSA+10%二抗种属来源的正常血清 in 1xPBS 条件封闭液:1%B

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