细胞冻存方法及步骤(总2页).docx

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精选优质文档-倾情为你奉上冻存细胞注意事项:购买的经过传代后,实验时一般要求先冻存起来一些细胞(一次全部用掉有些太浪费),冻存的除了能够重复试验外,还能作为备用细胞,是实验室的一种资源。为了最大限度保存活力,冻存细胞的时候要慢冻。由于甘油或二甲基亚砜(DMSO)能提高膜对水的通透性,不仅可使细胞内的水分渗出细胞,还能减少细胞内形成得冰晶损伤细胞,所以冻存细胞常用他们做保护剂。冻存的时候需要对细胞做一定的处理,那么处理时应该注意哪些事项呢?冻存细胞注意事项:1、前1224h,换新鲜,使细胞一直处于对数生长期。2、待长至80%汇合时胰酶消化,用新鲜培养基吹打后制成细胞悬液,1000rpm离心10min。悬浮细胞则直接离心。3、弃上清,加入冻存液重悬细胞沉淀,调整细胞浓度为31061107cells/mL。将细胞悬液分至冻存管内,每管11.5mL,拧紧盖子。在管壁上做好标记,标明名称、冻存日期等。(冻存细胞液配方可为:培养基:DMSO=4:6:1或:培养基:DMSO=1:9:1或:DMSO=9:1,可根据各实验室实际条件调整)4、按下列

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