流式细胞术的样品制备(共4页).doc

精选优质文档-倾情为你奉上第二节流式细胞术的样品制备 节概述待测标本的制备是流式细胞术分析的关键，本节分别直接免疫荧光标记、间接免疫荧光标记、微量全血法免疫荧光标记、双标记、培养细胞DNA荧光标记以及细胞凋亡检测样品的制备。知识点导航1.直接免疫荧光标记的样品制备用标有荧光素的特异抗体对细胞进行直接染色，然后用流式细胞仪检测，阳性者即表示有相应抗原存在。实验步骤如下：(1)每份取100 l单细胞悬液(细胞密度约1106个细胞)。(2)一份加入相应量的异硫氰酸荧光素或藻红蛋白标记的特异性荧光直标单抗，另一份加入荧光标记的无关单抗，作为阴性对照样品。(3)室温下避光反应一定时间(时间长短根据试剂说明书要求进行)，一般在室温下反应1530min即可。(4)加入500 l磷酸缓冲液重悬成单细胞悬液即可上机检测。2.间接免疫荧光标记的样品制备(1)取1106个细胞/100l，先加入一抗混匀，置室温下避光反应30 min。(2)用PBS洗涤细胞2