1、本科毕业论文（20 届）生地黄与熟地黄重金属含量的研究所在学院 专业班级 中药学(中药分析与鉴定方向) 学生姓名 学号 指导教师 职称 完成日期 年 月 I诚 信 声 明我声明，所呈交的毕业论文是本人在老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我查证，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。我承诺，论文中的所有内容均真实、可信。毕业论文作者（签名）：年 月 日II目 录生地黄与熟地黄重金属含量的研究摘要：目的 研究生地黄与熟地黄重金属的含量。方法 采用微波消解制备汞试液，原子荧光光谱法测定汞（Hg
2、）含量；电感耦合等离子体质谱法测定重金属铬（Cr）、铜（Cu）、砷（As）、镉（Cd）、铅（Pd)的含量。结果 对于各元素测定，标准曲线的相关系数:R= 0. 9995 1.0000，重复性：RSD 为1.25%10.17%；回收率为 97.2%116.3%；生地黄重金属中 铬（Cr）、铜（Cu）、砷（As）、镉（Cd）、铅（Pd) 、汞（Hg）的平均含量分别为8.3718mg/kg、2.6818mg/kg、0.8308mg/kg、0.0525mg/kg、1.1907mg/kg、0.0165mg/kg 及熟地黄中铬（Cr）、铜（Cu）、砷（As）、镉（Cd）、铅（Pd)、汞（Hg）的平均含量分
3、别为1.5235mg/kg、2.1936mg/kg、0.4362mg/kg、0.0276mg/kg、0.6176mg/kg、0.0107mg/kg。结论 该方法简便、快速、准确，可用于生地黄和熟地黄 6 种重金属元素的含量测定；生地黄重金属的含量高于熟地黄重金属的含量。关键词：生地黄；熟地黄；重金属含量；微波消解；原子荧光光谱法；电感耦合等离子体质谱法IIStudy on the content of heavy metals in Rehmanniae Radix and Rehmanniae Radix PraeparataAbstract: Objective To study the
4、content of heavy metals in Rehmanniae Radix and Rehmanniae Radix Praeparata.Methods After ptetreatnent by microwvave digestion system，trace mercuxy in several cmimon Rehmannia root were dedetemi fined by AFS ，and To establish an ICP-MS method for the determination of heavy metals， Includingcopper(Cu
5、)，arseniun(As)，cadmium(Cd)and plumbum (Pb)，Chromium（Cr）in Rehmannia root.Results For all of the analyzed heavy metals， the correlative co-efficient of the calibration curves was in the range of 0. 9995-1.0000，and RSD were in the range of 1.25%-10.17%.The recovery rates were in the range of 97.2%-116
6、.3%;The content of heavy metals of Rehmanniae Radix The average contents of heavy metals of Rehmanniae Radix were measured to be Cr (8.3718 mg/kg)，Cu(2.6818 mg/kg)，As（0.8308 mg / kg)，Cd( 0.0525 mg/kg)，Pb(1.1907 mg/kg)，and Hg (0.0165 mg/kg)；and the average contents of heavy metals of Rehmanniae Radix
7、 Praeparata were measured to be Cr (1.5235 mg/kg)，Cu(2.1936mg/kg)，As（0.4362mg / kg)，Cd( 0.0276 mg/kg)，Pb(0.6176 mg/kg)，and Hg (0.0107 mg/kg). Conclusion The method is convenient rapid accurate and can be applied to determine four heavy metals，including Cu 、As、Cd 、Cr、pd、Hg in Rehmanniae Radix and Reh
8、manniae Radix Praeparata；The content of heavy metals of Rehmanniae Radix higher than Rehmanniae Radix Praeparata.Kewords: Rehmanniae Radix，Rehmanniae Radix Praeparata，Content of heavy metals， Microwane digestion，Atomic Fluoresence(AFS)，Inductively coupled plasma mass spectrometry(ICP-MS)III11 前言地黄为玄
9、参科植物地黄(Rehmannia glutinosa Libosch)的块根，具有清热凉血、养阴生津之功效，始载于神农农本草经列为上品，为我国“四大怀药”之一。中国药典（2010）版收载有鲜地黄、生地黄、蒸熟地黄(蒸法)、酒熟地黄(酒炖法) 1 。将鲜地黄缓缓烘焙至八成干即为地黄，其性寒，味甘，能清热凉血，养阴生津。地黄进一步加工炮制即得熟地黄，其性微温，味甘，能滋阴补血，益精填髓 2。地黄是我们经常接触的药材，它经常以不同的形式存在于各种剂型，然而重金属的存在造成地黄质量的下降，也对人体的新陈代谢及正常的生理作用有明显的伤害作用，并抑制人的正常生理作用的发挥，同时人体内重金属含量过量会导致各
10、种疾病的发生 3。由于重金属能对人体的新陈代谢及正常的生理作用产生严重影响，对人体有较大的伤害作用，重金属残留污染也己成为影响中药出口的严重障碍，因此，中药重金属的问题越来越被人们关注 4。重金属是一种很危险的环境污染物，在极其微量的情况下也会产生不良后果 5，人体对重金属元素只能耐受微小的剂量，摄入剂量稍大或长期(即使少量)摄入，当体内累积到一定量时，也可引起中毒，使人体健康受到危害 6。 铅（Pb）、镉（ Cd）、汞（ Hg）、砷（As）、铋（ Bi）、锑（Sb ）等是目前公认的对人体有害的微量元素。人体吸收这些元素后，累积到一定量时可引起免疫系统障碍，神经、内分泌、肝、肾功能受损，从而引
11、起一系列的中毒症状。如血铅浓度的升高会损害儿童的认知能力发展并减少智力思维活动，此外，还会引起成人的心血管机能失调 7-8；汞主要损害肾脏，造成肾功能衰竭，而砷可引起肝、肾、心等实质器官的损害 9；铬主要可能引起癌症，尤其是肺癌，引起气喘及尘肺症呼吸系统不良反应；镉不仅具有肾毒性，还会损害骨骼和生殖系统并引起其他健康问题 10。不同国家和地区均对它们的残留有严格的限制，对它们的检测使保证药品质量和用药安全有着重要的意义。中药材的样品前处理和检测技术较为落后，传统测定中药材中重金属元素的样品前处理方法耗时长、步骤繁琐、效率低，而且加热消解过程安全性差。近余年来微波消解技术受到人们的普遍关注，已是
12、目前测定中药中重金属元素2的最佳前处理方法，重金属元素中的汞等采用其他消解方法经常造成消解损失，微波消解技术恰能弥补其他方法的此项不足。微波消解技术逐渐成为一种常规的样品处理手段 11本实验用微波消解制备供试液，采用原子荧光光谱法法对生地黄和熟地黄汞的含量进行了测定，该方法灵敏度高，分析速度快，得到了满意的结果 12；中国药典（2010 年版）一部中采用电感祸合等离了体质谱法测定重金属，湿法消解制备供试液，采用 ICP-MS 法测定铅（Pb ）、镉（Cd）、铜（Cu ）、砷（As）、铬（Cr）的含量，利用中国药典（2010 版）、药用植物及制剂进出口绿色行业标准和食食品中污染物限量来对铅（Pb
13、）、镉（Cd ）、铜（Cu ）、砷（As）、铬（Cr）汞（Hg）含量的判断，对生地和熟地的重金属含量进行分析比较，为地黄的重金属控制提供参考。现阶段，中药中重金属元素检测技术研究也已被列入国家“十一五”攻关项目，以期建立与国际双向接轨的检测技术平台与限量标准。只有加大对中药重金属的控制，才能提高中药质量，确保临床用药安全，使中药真正走出国门，参与国际医药市场的竞争。如何解决并控制好中药中重金属的含量，已成为目前中药安全性中的焦点问题之一。2 材料与仪器2.1 材料生地黄和熟地黄 2014-12 采于广州清平中药材市场，产地河南。2.2 试剂与试药进口硝酸（GR） 韩国德山药品试剂厂 (批号：D
14、9961)高氯酸 (GR) 广州化学试剂厂(批号：20140801-1)过氧化氢(GR) 成都市科龙化工试剂厂硫脲 广州化学试剂厂氢氧化钠 广州化学试剂厂汞标准液 国家钢铁材料测试中心(批号：13080982）3砷标准液 国家钢铁材料测试中心(批号：14010212）铅标准液 国家钢铁材料测试中心(批号：14010972）镉标准液 国家钢铁材料测试中心(批号：14000772）铬标准液 国家钢铁材料测试中心(批号：14021812）铜标准液 国家钢铁材料测试中心(批号：14050612）柑橘叶 国家钢铁材料测试中心内标液 Agilent Technogies超纯水 实验室自制2.3 仪器DB-
15、型数显电热板 上海科恒实业发展有限公司ETHOS PLUS 1 型微波消解 北京莱伯泰科仪器有限公司PF6 系列原子荧光光谱仪 北京谱析通用仪器有限责任公司Agilent7500 系列电感耦合等离子体质谱仪 安捷伦科技公司BS224S 电子天平 北京赛多利仪器系统有限公司PCDX-WJ-30 分体式超纯水系统 成都品成科技有限公司3 方法3.1 试样的制备3.1.1 汞（Hg）的试样制备（微波消解）称取 0.5g（精确到 0.0001 g）试样粉末于消解罐中加入 8mL 硝酸，2 mL过氧化氢，盖好安全阀后，将消解罐放入微波炉消解系统中，至消解完全，冷4却后用超纯水定容至 10 mL 混匀待测
16、。3.1.2 铬（Cr）、铜（Cu）、砷（As）、镉（Cd）、铅（Pd)的试样制备（湿法消解）称取试样 1 g（精确到 0.0001 g）于锥形瓶中，加 17 mL 混合酸（硝酸:高氯酸 4:1），加一小漏斗于电炉上消解，若变棕黑色，再加混合酸，直至冒白烟，消化液呈无色透明或略带黄色，放冷，用超纯水将试样消化液洗入 25 mL 容量瓶中，用水少量多次洗涤锥形瓶，洗液合并于容量瓶中并定容至刻度，混匀待测；同时作试剂空白。3.2 标准曲线的配制3.2.1 汞（Hg）曲线的配制分别取 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL 的 50ng/mL 标准汞使用液于 25mL容量瓶，5% 的硝酸溶液
17、定容。即（0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ng/mL) 还原剂配置5g/L 氢氧化钠溶液作溶剂，配成 15g/L 硼氢化钠溶液载液：5%HNO 3 3.2.2 混标液曲线的配制和内标溶液的制备精密吸取混合标准储备液（砷、铅、铜、镉、铬的含量均为 1ug/mL)0.00、0.25、0.50、0.75、1.00mL 于 25mL 容量瓶中，用 1%HNO3 溶液定容到刻度，摇匀，即得到砷、铅、铜、镉、铬的标准系列均为0、4、10、20、30、40ng/mL。另精密吸取 1ml(含 Li（6）、Sc（45）、Ge（72）、Y(89)、In（115）、Tb（159）、Lu（176) 、Bi（
18、209）)的 100mg/mL 内标液于 100mL 容量瓶中1%HNO3 溶液定容 lug/mL 内标液。3.3 测定3.3.1 原子荧光分光光度计（AFS）测定5设定好仪器的最佳条件见表 2，逐步将炉温升至所需温度，稳定 10 min 20 min 后开始测量，连续用标准系列的零管进样，待读数稳定之后，转入标准系列的测量，绘制标准曲线，转入试样测量，分别测定试样空白和供试品。3.3.3 电感耦合等离子质谱仪（ICP-MS）测定设定好仪器的最佳条件见表 3，将样品溶液和内标溶液分别同时通过样品管及内标管进入三阀内混匀，再进入雾化器等进行检测。3.4 仪器工作条件的测定3.4.1 微波消解仪条
19、件 表 1 微波消解仪条件功率 /Watt 温度/ 压力 /bar 升温时间/min 保温时间/min1000 180 40 40 03.4.2 原子荧光光度计仪器测汞(Hg)含量的工作条件表 2 原子荧光光度计仪器测汞(Hg)条件仪器参数 参数值 仪器参数 参数值负高压(V) 280 测量方式 标准曲线法阴极灯电流(mA) 50 信号类型 峰面积辅助等电流(mA) 30 读数时间(s) 20原子化器高度(mm) 8 延迟读数时间(s) 5载流液 5%HNO3 NaBH4 溶液 5g/L 氢氧化钠，15g/L 硼氢化钠氩气流速(mL/min) 300 屏蔽气流速( mL/min) 6003.4.3 电感耦合等离子体质谱仪工作条件表 3 电感耦合等离子体质谱仪工作条件等离子体流速(L/min)采样深度(mm）载气流速(L/min)分析时间（s ）雾化室温度()重复次数15 8 1.17 0.1 2 3
