1、本科毕业论文（20 届）响应面法优化火炭母中总黄酮的提取工艺研究所在学院 专业班级 中药学(中药分析与鉴定方向) 学生姓名 学号 指导教师 职称 完成日期 年 月 I诚 信 声 明我声明，所呈交的毕业论文（设计）是本人在老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我查证，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文（设计）中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。我承诺，论文（设计）中的所有内容均真实、可信。毕业论文（设计）作者（签名）： 年 月 日II目 录摘要 .-1 前言 .12 材料与仪器 .32.1 试剂与试药 .32.2 仪器 .3
2、3 方法 .43.1 芦丁对照品标准曲线的建立 .43.2 方法学考察 .43.3 单因素考察方法 .73.4 结果 .104 讨论 .144.1 提取条件分析 .145 结论 .16参考文献 .17综 述 .19参考文献 .23致 谢 .25III响应面法优化火炭母总黄酮提取工艺研究摘要:目的 采用响应面法优化火炭母总黄酮的提取工艺。方法 以火炭母为试材，以乙醇溶液为提取溶剂，在单因素实验的基础上，采用响应 Box-Behnken 进行实验设计，对火炭母中黄酮类物质的提取条件进行优化，考察了料液比，提取时间，乙醇浓度对提取率的影响。结果 黄酮类物质的最佳提取条件为提取剂 67.21%乙醇，料
3、液比 1:79.09，提取时间 2.03h，提取率为20.26mg/g。结论 该工艺经试验含量测定方法简便、准确、重复性好，提取工艺经济、合理，值得进一步推广，对进一步的工艺开发有较好的参考价值。关键词: 火炭母；总黄酮；响应面法IVOptimization Extraction Conditions of Total Flavonoids form Polygonum chinense by RSMAbstract: Objective Optimization extraction conditions of total flavonoids form Polygonum chinense
4、 by RSM. Methods With Polygonum chinense as material and ethanol as solvent.the extraction of total flavonoids from Polygonum chinense were optimized by response surface methodology based on Box-Behnken.The research had investigated the influence of some factors on extraction effect of total flavono
5、ids which included ratio of material and ethanol, extraction time, and liquid. Results The optimum extraction conditions were as follows extraction was 67.21%ethanol, ratio of material and liquid was1:79.09, extraction time was 2.03h, and the extraction rate of flavonoid was20.26mg/g.Conclusion The
6、content determination method is simple, accurate and reproducible. Extraction which is technology, reasonable and economy worths of further promotion and to the further development ,it has good reference value.Keyword: Polygonum chinense; flavonoid; response surface methodology11 前言火炭母是蓼科蓼属植物火炭母（Pol
7、ygonum shinese L.）的干燥全草 1-2，植物名实图考：“其子青黑如炭。 ”3故名。别名火炭毛，乌炭子，乌白饭草，山荞麦草，火炭星、鹊糖梅，赤地利、乌饭藤、水沙柑子、鸪鹚饭、水退痧，红梅子叶、白饭草、大叶沙滩子，老鼠蔗等 4，生于水边、山谷、湿地，分布于分布于浙江、江西、福建、台湾、湖北、湖南、广东、海南、广西、四川、贵州、云南、西藏等地等地区，常夏、秋间采收，鲜用或晒干 5。火炭母是广东地区常用的中草药之一，亦是广东凉茶、王老吉、二十四味和腹可安等中药保健品主要原料之一 3。全国中草药汇编火炭母其味辛、苦，性酸、甘、凉，有清热解毒，利湿消滞，凉血止痒，明止退翳之功效，可用于治疗
8、痢疾，消化不良，肝炎，感冒，扁桃体炎，咽喉炎，白喉，百日咳，角膜云翳，乳腺炎，霉菌性阴道炎，白带，疖肿，小儿脓疱，湿疹，毒蛇咬伤等病症。1.本草图经：“味酸，平，无毒。“去皮肤风热，流注，骨节痈肿疼痛。2.生草药性备要：“味酸，性寒。“炒蜜食能止痢症。敷疮、敷跌打、贴烂脚，拔毒、干水、敛口。中草药学中用 10%的火炭母滴眼液治角膜薄翳,角膜斑翳等。中药志对其性状、显微、理化进行了研究, （1）取本品粗粉约 5g，加乙醇 50ml，置水浴上回流30min，稍冷，加活性炭少量，滤过，滤液浓缩至约 5ml。取滤液 2ml，加镁粉少量与盐酸 5 滴，置水浴中加热 3min，显橙色或橙红色。（2）取上述
9、滤液点于滤纸上，干后，置紫外光下观察，显黄色荧光，再喷以 1三氯化铝的乙醇溶液，荧光加强。迄今为止，从火炭母全草中共分离得到 20 多种化合物，主要为黄酮及其苷类，酚酸类和甾体类，对火炭母的化学成分进行了研究，从乙酸乙酯部分分离得到 9 个化合物，经分析分别鉴定为谷甾醇，正三十二烷醇，没食子酸甲酯，没食子酸，胡萝卜苷，槲皮素，槲皮苷，金丝桃苷等化合物。通过对火炭母药材醇提物乙酸乙酯部分化学成分研究，发现酚酸类化合物和黄酮类从量上看，两者几乎相当。酚酸类化合物和黄酮类在抗炎，抗氧化和免疫等方面存在相似的药理活性，不过两者的作用靶点和作用机理也是存在较大的差异，建议把酚酸类和黄酮类都作为质量控制的
10、指标性成分 6。2黄酮类化合物是一类植物次生代谢产物, 广泛存在于高等植物的根、茎、叶、花、果实等中，数量种类繁多，且结构类型复杂多样 7。黄酮类化合物其基本母核为 2-苯基色原酮，泛指两个具有酚羟基的苯环，通过中央三碳原子相互连结而成的一系列化合物 8。黄酮类化合物结构中常连接有酚羟基、甲基、甲氧基、异戊烯基等官能团。此外，它还常与糖结合成苷。黄酮类化合物因其独特的化学结构而对哺乳动物和其它类型的细胞具有许多重要的生理、生化作用，是许多中草药的有效成分。一方面，黄酮类化合物具有很多重要的药理作用，对许多人类疾病具有治疗价值；另一方面, 黄酮类化合物具有高度的化学反应性，如，有抗氧化作用。它们
11、拥有抑制酶的活性、抗菌、抗炎症、抗癌、抗过敏、抗病毒、抗糖尿病并发症等功能,对人类的衰老、肿瘤、心血管病等退变性疾病的治疗和预防有重要意义 7，据报道，适量摄入黄酮类化合物能减少癌症、心血管疾病、肿瘤、脂质过氧化以及骨质疏松等疾病的发病率。因此，其引起了国内外化学家的广泛重视，近年来研究进展很快。随着对其构效关系的深入研究，发现了黄酮类化合物部分药理作用的作用机制，为其在医药、食品领域的应用提供了理论依据，加快了黄酮类化合物的开发利用。迄今为止，人们已经合成了一系列具有多种生物活性, 溶解性好的黄酮类衍生物。此外，黄酮类化合物还是茶及众多中草药如银杏、黄芩、沙棘等的活性成分。因此，引起了国内外
12、药物学家、化学家的广泛重视，研究进展很快。黄酮类化合物的生理活性与其独特的化学结构密切相关。天然黄酮类化合物虽大量存在于自然界中，但其结构复杂、作用位点多、溶解性差，其生理活性的利用率不高，限制了它们的广泛应用。因此，以黄酮类化合物为先导化合物，对其进行结构改造和结构优化，以研发一批具有更强药理作用的黄酮类新药，是该研究领域的一个重要课题 8-11。32 材料与仪器2.1主要材料与试剂芦丁对照品 中国食品药品检定研究院（110753200413）火炭母药材 中智中药饮片有限公司（20130801）中智中药饮片有限公司（20140401）佛山市中药饮片有限公司（20130501）乙醇 天津市富宇
13、精细化工有限公司亚硝酸钠 天津市百世化工有限公司硝酸铝 天津市科密欧化学试剂有限公司氢氧化钠 广州化学试剂厂超纯水 实验室自制2.2主要仪器： KQ3200DE 型数控超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司UV1102 紫外可见分光光度计 上海天美科学仪器有限公司CP225D 型电子天平 德国 Sartorius 公司JA2003 型电子天平 上海舜宇恒平科学仪器有限公司HH-S4 数显恒温水浴锅 金坛市医疗仪器厂TC-15 套式恒温器 海宁市新华医疗器械厂JA2003 电子天平 上海恒平科学仪器有限公司GZX-9246MBE 电热恒温鼓风干燥箱 上海博迅实业有限公司医疗设备厂DFY-300 摇
14、摆式高速万能粉碎机 温岭市林大机械有限公司WS70-1 型红外快速干燥器 巩义市予华仪器有限责任公司SHZ-D() 循环式真空泵 巩义市英峪予华仪器厂43 方法3.1芦丁对照品标准曲线的建立3.1.1 对照品储备溶液的制备取芦丁对照品约 3mg，精密称定，置 25mL 量瓶中，加 70%乙醇适量，振摇使溶解，用 70%乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液 I，芦丁浓度为0.1200mg/mL。同法配制对照品储备液，芦丁浓度为 5.980mg/mL。3.1.2 供试品溶液的制备取火炭母粉末 0.5g，精密称定，加 70%乙醇溶液 40mL，加热回流提取2h，提取液趁热减压过滤，转移至 100m
15、L 量瓶中，加 70%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。3.2方法学考察3.2.1 标准曲线的制备精密吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5和3.0mL的对照品储备液I，分别置于10mL容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液0.3mL，摇匀，放置6min，加入10%硝酸铝溶液0.3mL，摇匀，放置6min，加入4%氢氧化钠溶液4.0mL，加入70%乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min，作为对照品系列溶液，以不含芦丁的空白溶液为参比，于波510nm处测定吸光度，以对照品浓度( X)为横坐标，相应对照品吸光度( Y)为纵坐标，绘制标准曲线测定结果见表1，绘制标准曲线结果见图1。表1 火炭母总黄
16、酮标准曲线测定结果浓度(ug/ml) 吸光度（A）0.1200 0.1210.2400 0.2580.3600 0.3810.4800 0.5120.6000 0.64250.0000.1000.2000.3000.4000.5000.6000.7000.8000.9000.000 10.00020.00030.00040.00050.00060.00070.00080.000浓 度 （ ug ml）吸光度（A)图 1 芦丁标准曲线得芦丁的回归方程为 Y=1.07010-2X-2.50010-3(r=0.9997)，结果表明，芦丁的浓度在 0.12000.7200mg/mL 浓度范围内与吸光度
17、呈良好线性关系。3.2.2 精密度试验 称取火炭母粉末约0.5g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备，按“3.1.2”项下相同方法进行显色，于510nm波长处 重复6次测定吸光度结果见表2。结果RSD为0.26% （n=6 ），表明仪器的精密度较好。表 2 仪器精密度试验结果编号 吸光度值 平均值 RSD（%）1 0.5142 0.5113 0.513 0.513 0.264 0.5135 0.5146 0.515 3.2.3 稳定性试验称取火炭母粉末约0.5g，精密称定，按供试品溶液制备方法制备，按“3.1.2”项下相同方法制备供试品溶液，显色，于510nm 波长处，分别在0，0.5，1.0，1.5，2，2.5 h时分别测定吸光度，结果为RSD为1.3%(n=6) 表明供试品溶液在2.5h内稳定结果见表3。0.7200 0.761
