精选优质文档-倾情为你奉上蛋白纯化培训总结蛋白质分离纯化一般需经过细胞破碎、澄清、分离等步骤。1 细胞破碎常见的细胞破碎方法有超声破碎法、反复冻融法、高压匀浆法、珠磨破碎法等。实验中应根据实验室现有实验条件来选择合适的破碎方法。冻融法操作十分简便，无需特殊设备，在实验室中使用很方便，但耗时，耗能，大规模应用困难。珠磨破碎法适用范围较广，但对操作者的经验水平要求较高，且制备量不易放大。本实验室主要采用高压匀浆法破碎细胞，一方面可以得到充分破碎的细胞，高压匀浆机的制冷系统也可减少蛋白质的热变性的可能，另一方面此种方法与其他方法相比，可在增大细胞破碎量的时候有效的节约时间。若不具备高压匀浆破碎细胞的条件，也可采用超声破碎法，但超声破碎的效率受到声频、声能、处理时间、细胞浓度及菌种类型等多种因素的影响。2 澄清经过细胞破碎的蛋白样品中含有大量的细胞碎片，不利于此后纯化过程的进行，需对样品液进行澄清处理。这一过程可通过离心、过滤、微滤等方法进行。实验室较多采用离心的方法获取澄清的液体，也可使用微滤的方法，如使用膜孔大小低于0.45m的滤膜进行过滤，但容易出现频繁
