DNA的限制性酶切及电泳分析(共2页).docx

精选优质文档-倾情为你奉上DNA的限制性酶切及电泳分析实验目的：1掌握限制性核酸内切酶消化DNA的原理。2掌握重组质粒DNA的酶切鉴定方法。3掌握琼脂糖凝胶电泳分析酶切结果。基本原理限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶（水解磷酸二酯键）。根据酶的识别切割特性、催化条件及是否具有修饰酶活性，可分为、型三大类。通常所指的DNA限制性核酸内切酶就是型酶。主要试剂:重组质粒DNA 插入片段300bp本实验所用限制性核酸内切酶为EcoR，其识别顺序为：5-GAATT C-33-C TTAAG-5磷酸二脂键断裂 产生5粘性末端。操作步骤1. 反应体系的建立： 在一无菌1.5 ml Eppendorf管中加入：无菌双蒸水 7 l10酶切缓冲液 2 l质粒DNA(100 ng/l) 10 lEcoR(5 U/l) 1 l总体积为20l 轻轻混