精选优质文档-倾情为你奉上使用流式细胞仪检测活细胞内的ROS基本原理：CM-H2DCFDA在细胞内水解成DCFH , DCFH被胞内的氧化剂氧化成高荧光强度的DCF，用于检测ROS的生成。Dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA)是非极性的化学物质能自由通透细胞膜。进入细胞后，被easterase去掉两个乙基,形成具有极性的2,7- dichlorodihydrofluorescein(DCFH),保留在细胞内。当细胞产生H2O2与DCFH反应,使DCFH形成了2,7 dichlorodihydrofluorescein(DCF)，通过流式细胞仪测定细胞内DCF的荧光强度，即可对单个细胞为基础的细胞内ROS进行原位实时检测，从而根据荧光强度直接反映细胞内自由基的变化程度。（见下图）主要试剂：1.PC-12细胞株2.DCFH-DA粉剂（sigma）3.5 mg溶解于721 ul 100%乙醇中（这时的浓度为10.0 mM），之后用DMEM培养液稀释上述溶液10倍，配置成1.0 mM
