1、槐花米中芦丁的提取、分离和鉴定制作人：熊 燕一、实验目的要求 1、掌握黄酮类化合物的提取和分离的原理和方法。 2、掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。3、了解 IR及 NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。二、实验原理 中药槐米中的主要化学成分 主要含有芦丁、槲皮素，还含少量皂苷类及多糖、粘液质等。 槐米含芦丁可高达 23.5%，槐花开放后降至 13.0%。 芦丁可用于治疗毛细血管脆性引起的出血症，并用作高血压辅助治疗剂。 芦丁还可以作为制备槲皮素、羟乙基槲皮素、羟乙基芦丁、二乙胺基乙基芦丁等的原料。芦丁的化学结构式芦丁的化学结构式槲皮素的化学结构式槲皮素的化学结构式 芦丁为浅黄色粉末或极
2、细微淡黄色针状结晶，含 3分子结晶水（ C27H30O163H 2O），加热至 185 以上熔融并开始分解。芦丁的性质 芦丁可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰醋酸、乙酸乙酯中，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。 芦丁的溶解度，在冷水中 1:10000，沸水中 1:200，沸乙醇中 1:60，沸甲醇中 1:7 芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性， 易溶于碱液中，酸化后又可析出， 因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。 碱溶酸沉法原理由槐花米中提取芦丁的方法很多，本实验是根据芦丁在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制，或根据芦丁分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂
3、煮沸提取，其提取液加酸酸化后则芦丁游离析出。 三、 实验流程搅拌下加入石灰乳加水300ml槐花米（ 15g）调节 PH8-9直火加热保持微沸 30min双层滤纸趁热抽滤 滤液残渣在 60-70度下，用浓盐酸调 PH3-4静置1、芦丁的提取注意及时补充水和石灰乳，维持PH 89 趁热抽滤时，注意防止滤液因减压而沸腾。1.5g CaO 加 10ml水 第一次实验所得滤液滤液 沉淀（粗品芦丁） 均分 2份重结晶 水解抽滤按 1:60量加入蒸馏水，沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15分钟后，趁热抽滤残渣滤液冷却 静置，抽滤精制芦丁 按 1:70量加入 2%硫酸，加热 40min，放冷静置，抽滤沉淀滤液干燥
4、、 95乙醇 重结晶槲皮素 糖鉴定 酸水解过程中，注意补充蒸馏水，维持原体积。 2%的硫酸用98%浓硫酸自己配制，注意浓硫酸和水的加入顺序。抽滤时，热烧杯勿直接放在实验台上，防止烧杯炸裂。2、芦丁的精制与水解实验名称 实验试剂 现 象 芸香苷 槲皮素Molish反应 10%- 萘酚乙醇、溶液 -浓硫酸紫色环 无现象盐酸 -镁粉反应 盐酸 -镁粉 红色紫红色醋酸镁反应 1醋酸镁甲醇溶液 黄色荧光（紫外灯）三氯化铝反应 1三氯化铝乙醇溶液（紫外灯）黄色荧光锆 -柠檬酸反应 2二氯氧锆甲醇溶液 2柠檬酸甲醇溶液 3 4滴 黄色并褪色 黄色不褪色3、芦丁、槲皮素的理化鉴别方法4、芦丁的 TLC鉴定 样品： 自制芦丁乙醇液 ; 自制槲皮素乙醇液。 对照品： 芦丁对照品乙醇液 ; 槲皮素对照品乙醇液。 吸附剂：聚酰胺薄膜。 展开剂： 氯仿 甲醇 甲酸 (15： 5： 1); 醋酸乙酯 甲酸 水 (8： 1： 1)。 显色剂： 喷三氯化铝试液，待乙醇挥干后，置紫外灯(365nm)下观察。
