精选优质文档-倾情为你奉上实验四 质粒pUC19转化大肠杆菌E. coli DH5a 内 容 提 要 采用质粒pUC19对实验三制备得到的大肠杆菌E. coli DH5感受态细胞进行转化，并利用抗生素来筛选转化子。 本实验要求： 1、掌握质粒转化实验操作技术。 2、能够计算感受态细胞的转化效率。原 理本实验以E. coli DH5a菌株为受体细胞，采用CaCl2法制备感受态细胞，并将pUC19 质粒转化至感受态细胞。进入受体细胞的质粒通过复制，表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。转化过程所用的受体细胞一般是限制修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(R，M)，它可以容忍外源DNA 分子进入体内并稳定地遗传给后代。由于pUC19质粒带有氨苄青霉素抗性基因(Ampr )，可通过Amp抗性来筛选转化子。如受体细胞没有转入pUC19，则在含氨苄青霉素的培养基上不能生长。能在氨苄青霉素培养基上生长的受体细胞（转化子）说明已导入了pUC19。转化子扩增后，可将转化的质粒提取出，进行电泳、酶切、测序等进一步
