精选优质文档-倾情为你奉上电转法设计方案一：感受态制备：1. 挑一环酵母菌接种于5mL YEPD培养基中，30、250-300rpm培养过夜；2. 取1mL一级种子分别接种于两瓶50mL YEPD培养基中，30、250-300rpm培养约16-18h(OD:1.3-1.5)；3. 于4离心收集菌体，用25mL冰无菌水洗涤一次后，细胞用10ml冰无菌水重悬，可换成较小的离心管；4. 加入1ml，pH7.5，10TE缓冲液，摇晃均匀，再加入1ml 10LiAc，旋转摇匀，于30度轻轻摇动45min；5. 再加入0.4ml 1 mol/L DTT，并同时旋转摇动，于30度轻轻摇动15min；6. 于4离心，弃上清（用枪吸），再用25mL冰无菌水洗涤；7. 2.5ml冰冷的1mol/L山梨醇洗涤，离心收集菌体，弃上清（用枪吸）；8. 每管用100ul山梨醇溶解，分装于EP管中（80ul/管），于-70冰箱保存。电转化：1 向感受态细胞中加入约510ug（体积小于10 ul）的DNA，用枪吹吸均匀，转移至预冷的电转杯中
