PCR常见问题、原因分析及其对策PCR技术简介 PCR常见问题、原因分析及其解决方案 提高PCR反应特异性的策略 主讲内容 PCR技术简介PCR PCR 标准反应体系 标准反应体系 DNA模板 引物 反应缓冲液 dNTP ddH 2 O 耐热聚合酶反应体系对PCR扩增的影响 DNA模板 纯度 蛋白、多糖、酚类等杂质会抑制PCR反应 完整性 模板降解会导致PCR扩增无产物 浓度 加量过多导致非特异性扩增增加 特异性 长度适当、避免二级结构和二聚体 完整性 避免反复冻融 浓度 应适当,过高导致非特异性增加,过低则 引 物 扩增产物太少反应体系对PCR扩增的影响 反应 Buffer Buffer pH值,盐离子浓度 稳定剂,增强剂 Mg 2 浓度 过高非特异性严重 过低无扩增产物 dNTP dNTP Mixture Mixture 浓度适当 避免反复冻融 ddH2O pH值适当 避免污染PCR PCR 标准反应体系 标准反应体系 DNA模板 引物 反应缓冲液 Mg 2 dNTP ddH 2 O 耐热聚合酶如何选择 最合适 最合适的DNA聚合酶 DNA 聚合酶的特性 PCR 实验的不同需求如何
