精选优质文档-倾情为你奉上1. TRV1和TRV2共注射时，选择植株下部的叶子（lower leaves）；2. 一般注射后过2周左右时，发生基因沉默，这个时候进行表型分析；3. 用反转录定量PCR检测目的基因在VIGS植株中的表达量，一般TRV-VIGS能使目的基因的表达水平大约下调80%；4. 为了确保侯选siRNA 序列只沉默单一的靶基因, 侯选siRNA 序列应在美国NCBI (National Center for Biotechnology Information) 的EST 或Unigene 数据库进行BLAST 同源性比对。当siRNA 序列只同源于靶基因时，才可以用于下一步的基因功能研究。5. 为确保对靶mRNA的有效抑制，针对每一个靶基因应该设计4条以上siRNA序列，进行化学合成后，通过实验筛选出沉默效率最高的siRNA 序列进行下一步的基因功能研究。6. 烟草(Nicotiana benthamiana)植株中八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase)基因PDSGGCACTCAACTTTA
