第五节 动物细胞培养的基本方法 一 细胞分离 1 离心分离法 用于从含有细胞的体液如血液、羊水、 胸腹水中分离细胞。一般用8001000rpm 离心510min。2 消化分离法 先从生物体取来组织块，将其剪碎，并用消化 液将其消化，使组织松散成细胞悬液，然后用缓冲 液洗涤、离心、去除残留的消化液而获得所需的细 胞。 常用的消化液有胰蛋白酶、乙二胺四乙酸、胰 酶柠檬酸盐、胰酶EDTA、胶原酶、链霉蛋白酶 、木瓜蛋白酶等。二 细胞计数 1 血球计数板计数 2 自动细胞计数器计数 3 结晶紫染色细胞核计数法 4 MTT染色计数法三 细胞传代 1 悬浮细胞的传代 加入一倍或几倍的生长液，然后分种两只或 多只培养瓶即可。2 贴壁细胞的传代 消化前需用肉眼或镜下观察需消化的细胞，确认细 胞有无污染； 加入消化液量要适当，以摇动时能盖满单层细胞为 度； 消化时间不宜过久，一般在室温下静置25min,当 见细胞层出现麻布样网孔时，即可倒去消化液。 终止消化要先倒去消化液，然后加入有血清的培养 基。 已培养过的瓶子可再次使用，但一般不要超过2 3次。 2倍体细胞培养时每次传代必须写上传代次数。 分种数量
