实验五--核酸琼脂糖凝胶电泳(共3页).doc

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精选优质文档-倾情为你奉上实验五 核酸琼脂糖凝胶电泳一、实验目的糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法,具有操作方便、经济快速等优点。本实验学习DNA糖凝胶电泳的使用技术,掌握有关的技术和识读电泳图谱的方法。二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是用于分离、鉴定和提纯DNA片段的标准方法。琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖,具亲水性,但不带电荷,是一种很好的电泳支持物。 DNA在碱性条件下(pH8.0的缓冲液)带负电荷,在电场中通过凝胶介质向正极移动,不同DNA分子片段由于分子和构型不同,在电场中的泳动速率也不同。溴化乙锭(EB)可嵌入DNA分子碱基对间形成荧光络合物,经紫外线照射后,可分出不同的区带,达到分离、鉴定分子量,筛选重组子的目的。但是EB具有致癌性,所以我们选用无毒,高灵敏度是Ex Green染料,。此核酸染料在紫外透照仪及可见光透射仪上均可使用。ExGreen外观呈红色,与核酸结合后,可用300 nm(紫外透射仪)激发。三、材料、仪器和试剂1、材料 大肠杆菌中提取的质粒DNA2、仪器 电泳仪;台式离心机;恒温水浴锅;微波炉;紫外透射仪;照相机或

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