1、流式细胞仪和细胞内细胞因子染色无红细胞的单细胞悬浮液制备的脾细胞，刀豆蛋白 A 爆炸或 PBL 在 FACS 缓冲液（PBS 中，用 1牛血清白蛋白和 0.05NaN 的 3）和细胞进行染色，在黑暗中在冰上 20 分钟，进行表面的表达 CD8（ APC-CY7），CD4（PerCP CY5.5），CD3 （FITC），CD137（FITC），CD19（PerCP-Cy5.5 标记），或 NK1.1（PE-CY7 所有的抗体，BD 生物科学，圣地亚哥， CA）。细胞内染色，细胞透性使用的 Cytofix / Cytoperm 试剂盒，根据生产商的方案，和细胞内细胞因子使用肿瘤坏死因子-，肿瘤坏死
2、因子- 或 IFN-（PR-700，BD 生物科学）。四聚体分析，进行温育的细胞悬浮液与 H2-K b / TRP-2 的 180-188 四聚体（SVYDFFVWL，APC- 标记， Sanquin，）或 H2-K b / OVA 257-264 四聚体，实物礼品 CM 25 分钟，在 37C 和 5CO 2 之前，随后的表面抗体染色。表面 MHC-I 类检测是由孵化 IFN-引物和未曝光 B16.F10 细胞与小鼠抗鼠 MHC I 类抗体，圣迭戈，随后孵育检测的山羊抗小鼠IgG2a 抗体，测量样品在 FACS 广东 II 流式细胞仪（Beckton Dickinson 公司，圣迭戈，CA）。使用 FlowJo 软件的数据进行了分析。
