实时荧光定量PCR 数据分析及常见问题分析一、数据分析 p定量PCR扩增曲线的各种概念一、数据分析 p什么是基线 基线是扩增曲线的水平部分。一、数据分析 p基线扣除一、数据分析 p什么是阈值 阈值是一个荧光强度值，穿过阈值与X轴平行的直线称为 阈值线。一、数据分析 p什么是Ct值 Ct值是阈值线与扩增曲线的交点对应在X轴上的值。一、数据分析 p基线一、数据分析 p基线一、数据分析 p基线一、数据分析 p基线一、数据分析 p阈值线一、数据分析 p阈值线二、常见问题分析 1、PCR扩增抑制（以Bio-CFX96为例） 扩增曲线荧光强度大小及Ct值大小可提示存在抑制。 H07存在扩增抑制；解决方法：将样本稀释后进行扩增。 （抑制物的影响可通过稀释样本消除）二、常见问题分析 pPCR抑制物 l 黑色素 l 多糖类 l 血红蛋白 l 尿素 l 其他 l 乙醇 l 蛋白酶K l 胍盐 l 苯酚二、常见问题分析 p血液中PCR抑制物的作用机制及对策 抑制物 作用原理 对 策 肝素 可结 合于DNA 和RNA 上； 对 反转录 酶和聚合酶有抑制作 用。 肝素酶或氯化锂 血红 蛋白 含有铁 ，释 放铁
