实 验 二 大肠 杆菌感受态细 胞的 制备 及转 化内容一：大肠杆菌感受态细胞的制备 实验目的 实验 原理 实验仪器、材料、试剂 实验步骤 1 2 3 4 注意事项 思考题 5 6实 验 目 的 v 掌握感受态细胞的概念及其意义。 v 掌握感受态细胞的制备原理与操作方法。实 验 原 理 感受态 ：受体（或者宿主）最易接受外源DNA 片段并 实现 其转 化的一种生理状态 。它是由受体菌的遗传 性状 所决定的，同时 也受菌龄 、外界环 境因子的影响。 制备 感受态 的细 胞一般选择对 数生长 期，新鲜 幼嫩 的细 胞是制备 感受态细 胞和进 行成功转 化的关键 。常用 的感受态 制备 方法包括KCl 、CaCl 2 等方法；后者因为 操作 简 便且符合大多数的分子克隆要求，因而被广泛采用。 CaCl 2 法的基本原理： 细 菌处 于低温（0）和低渗的CaCl 2 溶液 中，菌体膨胀 ，细 胞膜的通透性发 生了暂时 性的改变 ，转 化混合物中的DNA 形成抗DNase 的羟 基- 钙 磷酸复合物黏附于菌体表面，在 42进 行短时间 的热 激处 理，促进DNA 的吸 收。 实 验 原 理 Ca
