分子生物学实验 分子生物学实验 Experiments of molecular biology Experiments of molecular biology 授课教师：田生礼 授课教师：田生礼 实验一 实验一 核酸的提取 核酸的提取实验一 实验一 核酸的提取 核酸的提取 （质粒 （质粒 DNA DNA 的提取和纯化） 的提取和纯化） 【目的要求】 1学习载体的基本结构 2了解碱裂解法质粒提取过程中各步骤的 设计思想； 3掌握碱裂解法提取质粒的原理方法和各 项基本技术；【实验原理】 碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA和 线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离质粒DNA。 在pH值介于12.0-12.5这个狭窄的范围内，线性的DNA 双螺旋结构解开而被变性，尽管在这样的条件下，共 价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此 相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。当加入pH4.8乙酸 钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，共价闭合环状的质粒 DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准 确，而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分 开，复性就不会那么迅速而准确，它们缠绕形成网
