抗体工程要点ppt课件.pptx

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抗体工程抗原的来源 生物组织纯化 蛋白的纯化方法: 1.离子交换 2.凝胶过滤 3.亲和层析 4.输水作用层析 等。抗原的来源 人工合成(化学方法) 1.半抗原的合成 2.抗原多肽的合成:多肽合成仪抗原的来源 蛋白的重组表达 1.原核细胞的表达方法:大肠杆菌,枯草杆菌。 2.酵母细胞的真核表达方法:甲醇毕赤酵母的重 组表达。 3.昆虫细胞的表达: 杆状病毒表达载体。 4.哺乳动物细胞的表达: CHO,HEK293。 5.抗原的单独表达和融合表达。 6.表达标签(TAG): Fc标签,HIS标签,FLAG标 签(DYKDDDDK),C-MYC标签, GST标签等。 原核表达系统 质粒: 1.多克隆位点(MCS) 2.抗性基因 3.启动子(P) 4.复制起始位点 (Ori)原核细胞的表达 操纵子表达模型与启动子: 酵母真核细胞表达系统 酵母表达系统的优缺点: 1. 操作简便。 2. 表达量高。 3. 培养条件简单。 4. 易于纯化。 5. N-端可能会有氨基酸缺失。 6. 存在过量糖基化的可能。 昆虫杆状病毒表达系统哺乳动物细胞表达系统 稳定表达细胞系: CHO细胞 瞬时表达细胞系: 29

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