精选优质文档-倾情为你奉上实体瘤组织单细胞悬液制备及培养方案一、 单细胞悬液制备(一) 仪器、材料及试剂1. 仪器:(1) CO2培养箱(调至37),离心机,水浴锅(37),血球计数板;(2) 无菌器械:细胞培养瓶,50 ml离心管,平皿,吸管,移液管,纱布,200目/ 300目尼龙滤网,手术器械。2. 材料:肿瘤造模成功的大鼠3. 试剂:RPMI1640 培养基(含10%小牛血清),0.25%胰酶,Hanks液/PBS缓冲液,碘酒附:Hanks液配方: KH2PO4 :0.06g;NaCl:8.0g;NaHCO3:0.35g;KCl:0.4g;Glucose:1.0g; Na2HPO4H2O:0.06g;加H2O定容至 1000 ml注:Hanks液可以高压灭菌,4下保存。(二) 操作步骤 机械-胰酶消化法1. 取材:制备实体瘤单细胞悬液,肿瘤取材部位非常重要,体积较大的肿瘤组织中有退变或坏死区,取材时尽量避免用退变组织,挑选活力较好的部位。将大鼠麻醉,置75%酒精泡3-5 min(时间不能过