1、西洋参的免疫学研究药检室 韩红玉摘要：西洋参多糖、西洋参皂苷及其复方具有明显的免疫调节作用。本文综合了近些年关于免疫调节方面的研究文献，分别从临床实验、体外细胞实验和动物实验三方面探讨西洋参的免疫学机制。关键词：西洋参；多糖；皂苷；免疫调节西洋参（Panax quinquefolium L.）英文名：American ginseng 又名美国参、西洋人参、花旗参、洋参等，系五加科人参属多年生草本植物。西洋参原产于美国北部到加拿大南部一带，在我国黑龙江、吉林、辽宁、陕西等地已有大量栽培 1。西洋参具有与人参相似的功能，但又因其性凉而不同于人参，具有补气养阴，清热生津的功效，用于气虚阴亏，虚热烦倦
2、，咳喘痰血，内热消渴，口燥咽干 2。西洋参的活性成分主要有皂苷、单糖、多糖、蛋白质、酶类、氨基酸和微量元素等。研究发现西洋参药理作用涉及到糖尿病、癌症、心血管疾病、中枢神经系统等，同时也被用来作为一种免疫调节剂 3。近年来，关于西洋参提取物及与其他中药配伍应用对免疫调节作用的研究引起了人们的广泛关注并取得很大进展，其研究多集中于对西洋参多糖、西洋参皂苷及西洋参复方的免疫药理作用研究。本文综合了近些年关于免疫调节方面的研究文献，分别从临床实验、体外细胞实验和动物实验三方面探讨西洋参的免疫学机制。1.西洋参多糖的免疫学研究西洋参中多糖类物质是一类具有特殊生物活性的物质。西洋参及其提取物中均含有一定
3、的多糖类成分，目前分离出来的成分有蔗糖、人参三糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖、山梨糖、半乳糖醛酸、半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖等 4。多糖具有免疫作用，且其多糖成分主要通过调节宿主免疫反应提高机体防御功能，以达到抗肿瘤的目的 5。动物实验研究证实，多糖的免疫调节作用主要表现在:(1)对补体的作用。多糖能激活补体。多糖对正常豚鼠无影响，但对经过处理补体下降、吞噬率下降的豚鼠具有促进补体恢复的作用，并能促进中性白细胞吞噬率的提高和恢复。多糖可使羊红细胞免疫小鼠的 B 细胞增加，血清中特异性抗体及 IgG 显著增加，使豚鼠血清补体显著增加 6。(2)对淋巴细胞的作用。多糖可激发 T 淋巴细胞、B
4、 淋巴细胞的生物学功能，对小鼠 T 淋巴细胞、B 淋巴细胞的增殖有增强效应。朱伟等 7利用 3H 掺入法测定淋巴细胞转化，并用细胞增殖法测定白细胞介素 2（IL-2）合成，结果表明，西洋参多糖可协同亚剂量刀豆蛋白 A 促进脾淋巴细胞转化和白细胞介素 2 合成。安刚等 8以膜片钳技术记录了 T 淋巴细胞钙依赖性钾通道电流，发现西洋参多糖可使刀豆蛋白 A激活的 T 淋巴细胞钙依赖性通道开放率增加，开放时间延长，关闭时间缩短，说明西洋参多糖可使活化的 T 淋巴细胞内游离钙离子增加，促进淋巴细胞增殖分化、白细胞介素 2 产生，促进细胞毒性 T 细胞杀伤活性，从而发挥其免疫增强作用。(3)对免疫器官的作
5、用。西洋参多糖对环磷酰胺（CY）所致的外周血白细胞减少有明显预防作用，并在 200mg/kg 和 400mg/kg 体重剂量下能拮抗环磷酰胺作用下的胸腺、脾脏质量降低，增强正常和免疫低下小鼠网状内皮系统的吞噬功能 9。此外，朱文静等 10也通过动物实验研究了西洋参根中多糖对肝脏恶性肿瘤的抑制作用，探索西洋参多糖对肝脏肿瘤的治疗作用。该研究方法建立了 BABL/C 小鼠肝癌模型，用多糖干扰小鼠肝癌的发生发展，观测小鼠肝脏肿瘤以及脾脏的变化，评估小鼠的抗肝癌效果和西洋参多糖的免疫调节效果。结果随着多糖用量的加大，小鼠肿瘤重量明显减小，肿瘤抑制率明显增加，小鼠免疫调节越显著。可见西洋参多糖对肿瘤的抑
6、制作用明显，可以为肿瘤免疫治疗提供一条新途径。在体外细胞实验方面，于小娜 11等进行了西洋参多糖的体外免疫学评价。样品为经纯化的多糖有效组分 AEP-1 和 AEP-2；实验对象为小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（RAW264.7）；实验方法为将处于对数生长期的 RAW264.7 细胞（铺满培养瓶底面积 6080%），倒掉培养基，用PBS 清洗 2 次后重新加入 DMEM 完全培养基，并用细胞刮刀轻轻刮下，转移至离心管，1000 rpm 离心 5min，用 RPMI-1640 完全培养基调整密度为 2106个/mL。取 96 孔细胞培养板，每孔加入 100L 细胞，100L 样品液（2、20、100
7、、200、300g/mL），阳性对照组为 LPS（最终浓度为 1g/mL），空白组加入等量培养基。置于 5%CO2、37培养箱中培养 24 h。24 h 后分别取各组上清液 50L，加入 Griess 试剂 50L，室温下反应 15 min，于酶标仪上测定 540nm 处的吸光度。以 NaNO2为标准品，根据不同浓度梯度的吸光值绘制标准曲线。根据标准曲线计算上清液中的亚硝酸盐含量。收集测定 NO 后的培养板中的上清液，按照试剂盒的说明方法，测定上清液中细胞因子 TNF- 及 IL-6 的含量。结果表明，AEP-2、AEP 均能促进巨噬细胞 NO、TNF-、IL-6 释放，AEP-2 免疫活性强
8、，AEP-1 未有明显作用。 2.西洋参皂苷的免疫学研究西洋参皂苷是西洋参主要有效成分之一，也是生理活性最显著的物质。按其苷元的化学结构不同，可分为人参二醇型皂苷、人参三醇型皂苷、齐墩果酸型皂苷；按其在薄层色谱上 Rf值的大小，分别称为 Ra 类(Ral6),Rb 类(Rbl3),Rf 类和 Rg 类(Rgl3)等共计 20 余种单体。现代药理学研究表明,人参皂苷类成分具有调节机体免疫功能的作用。在临床实验方面，王卫霞等 12研究结果表明人参皂苷具有免疫调节作用，能提高实验动物的非特异性免疫和特异性免疫功能(包括细胞免疫和体液免疫)。临床观察表明人参皂苷可改善或调节机体免疫功能状态，可用于或辅
9、助用于免疫功能紊乱疾病。许力军等 13观察了西洋参茎叶皂苷对慢性肺原性心脏病(CPHD)患者细胞免疫功能的影响。采用流式细胞术检测 20 位CPHD 患者外周血 T 淋巴细胞亚群和 NK 细胞；RT-PCR 方法检测 IL-2。结果:CPHD 患者的免疫功能低下,经西洋参茎叶皂苷治疗后,西洋参茎叶皂苷能促进 T 细胞分泌细胞因子 IL-2 和促进IFNymRNA 表达。表明西洋参茎叶皂苷能提高机体细胞的免疫功能。王春刚等 14用西洋参叶皂昔(PQS)治疗乳腺癌放疗患者，探讨 PQS 对乳腺癌放疗患者细胞免疫功能的影响。将 30 例乳腺癌放疗患者随机分为 PQS 观察组(17 例)和对照组(13
10、 例)；两组在进行放射治疗的同时,PQS 组患者口服 PQS,对照组不给该药；放疗 40Gy 后取外周血测定白细胞计数，免疫球蛋白IgG,IgA,IgM，补体 C3,C4 及 T 淋巴细胞转化率(%)。结果表明，PQS 组中外周血白细胞计 数和淋巴细胞转化率明显高于对照组(P0.001)。但两组中免疫球蛋白 IgG ,IgA ,IgM 及补体C3,C4 水平差异无显著性，说明 PQS 对乳腺癌放疗患者的细胞免疫功能有明显的增强作用。尚智等 15进行了皂苷的体外细胞实验研究，将不同浓度的西洋参茎叶总皂苷加入体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中，以 NO 试剂盒检测培养上清液中 NO 的含量，以溴化四唑蓝
11、(Mrr)比色法检测巨噬细胞代谢能力及产生 IL-I 的活性。结果表明西洋参茎叶总皂苷可明显促进小鼠腹腔巨噬细胞代谢和产生 NO，且 NO 的产生呈剂量依赖关系，对 IL-I 的活性无明显影响。可见西洋参茎叶总皂苷可增强小鼠腹腔巨噬细胞活性，可能是西洋参茎叶总皂苷调节机体免疫功能的重要途径。在动物实验方面，史艳宇等 16探讨了西洋参有效部位（PQEP）的抗肿瘤作用及其免疫调节作用。方法采用小鼠肝癌（H22）和胃癌（MFC）两种移植瘤的动物模型，以肿瘤抑制率、免疫器官重量、NK 细胞活性和淋巴细胞增殖率作指标。结果,PQEP 有明显的抗肿瘤活性和免疫调节作用,其抗肿瘤作用和其免疫调节作用有明显的
12、相关性,PQEP 的抗肿瘤作用可能与激活体内免疫系统有关。赵珺彦等 17验证了西洋参提取物具有增强免疫力的作用。方法以小鼠为实验对象，研究西洋参提取物对刀豆蛋白 A(concanavalin，ConA)诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验、小鼠血清溶血素测定、抗体生成细胞检测(Jerne 改良玻片法)、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验、脏器体重比值等试验的影响。结果与阴性对照组比较，西洋参提取物能提高 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力、提高小鼠血清溶血素抗体积数水平、增加小鼠溶血空斑数、提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率；差异均有显著性(PO.05)。因此，西洋参提取物具有增强免疲力作用。李
13、艳娇 18等通过腹腔注射大剂量异丙肾上腺素，造成大鼠急性心肌缺血的实验动物模型。观察了三个不同给药剂量的西洋参果总皂苷对实验动物模型缺血性心电图的影响，研究其对抗心肌缺血的药理作用。实验方法：wistar 雄性大鼠 60 只，体重20020g，随机分为：对照组；阳性对照药银杏叶片 100mg/kg 组；西洋参果总皂苷 100mg/kg、50mg/kg 和 25mg/kg 三个给药剂量组。共 5 组，每组 12 只。每天灌胃给药 1 次，连续 5 天。最后 1 次 ig 给药后 30min，将动物 ip10%的水合氯醛（400mg/kg）麻醉，仰位固定于鼠板上，稳定 30min，记录一段正常标导
14、联心电图。待大鼠 ig 给药后 1h，ip 异丙肾上腺素 2mg/kg。随后，记录 30sec，1min、2min、3min、5min、10min、20min、30min 和 45min 的标准导联心电图。以大鼠在 ip 异丙肾上腺素后各测试点心电图 ST 段偏移总毫伏数（ST）、心电图发生 ST 段异常偏移的动物数（NST），以及心电图 ST 段偏移平均值（ST ）为观测指标。结果表明，西洋参果总皂苷对异丙肾上腺素所引起的大鼠心肌缺血有明显的保护作用，具有显著的抗心肌缺血的生物活性。胡国柱 19等探讨西洋参皂苷( PQLS) 抑制缺氧诱导的胚鼠大脑皮层神经细胞凋亡的作用机理。方法: 正常对照
15、组、凋亡阳性组、西洋参皂苷 0.025g/L 组、0.05g/L 组、0.1g/L 组、0.2g/L 组;SD 胚大鼠原代大脑皮层神经细胞体外无血清缺氧-复氧培养; 应用 MTT、DNA 电泳、免疫细胞化学染色等方法观察西洋参皂苷的适宜剂量、DNA 凋亡条带及凋亡调节蛋白 Bcl-2、Bax、Caspase-3 的表达率。结果表明，西洋参皂苷通过降低缺氧的神经细胞表达 Bax、Caspase-3，提高 Bcl-2 的表达及 Bcl-2 /Bax 比例阻断缺氧诱导的神经细胞凋亡，保护缺氧的神经细胞。3.西洋参复方制剂的免疫学研究通过临床实验，以西洋参、黄芪、菌灵芝等组成的方剂乙肝 1 号给 13
16、2 例慢性病毒性肝炎患者中 ，男 78 人女 54 人，年龄 5-65 岁，每日 3 次服用此方剂的水煎剂，连用 3 个月后发现，此方能提高患者巨噬细胞的吞噬能力、促进淋巴细胞转化及诱发产生干扰素，并能使机体产生的 IgM 降至正常水平，使慢性肝炎病人降低的补体 C3 大幅上升。由西洋参与多种维生索组成的多维洋参胶囊，给 100 例肺阴虚证患者口服，每日 3 次，每次 2 粒，连用 4 周，发现此胶囊可使患者的免疫球蛋白 IgG、IgA、IgM 水平明显提高，促进了其免疫功能的提高 20。 在动物实验方面，杜维霞等 21实验证实，以洋参多糖等有效成分制成的复方洋参多糖免疫增强剂能增加因肝癌、肺
17、癌和电离辐射造成免疫低下模型小鼠的 T3， T4细胞亚群的百分率(P0.001)，并提高 L3、 T4、 lyt-2 的比值，从而达到免疫增强作用。金文闻 22等探讨玛咖(Lepidium meyenii.)干粉与西洋参总皂苷粉合用对小鼠免疫功能的影响。方法:90 只小鼠进行刀豆素 A(ConA)诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和 NK 细胞活性测定;另 90 只小鼠进行小鼠半数溶血值(HC 50)测定和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。实验设 6 组:合用物低、中、高剂量(0.02, 0.2 和 1gkg -1d -1,玛咖根干粉和西洋参总皂苷粉按照质量比 93:7 进行均匀混合)组、单一玛咖(0
18、.93gkg -1d -1)组、单一皂苷组(0.07gkg -1d -1)和阴性对照(蒸馏水)组,每组 15 只。各组每日灌胃一次,每次 20mLkg -1,连续 30 d 后测定各项指标。结果表明，与对照组比较,合用物组显著提高 ConA 诱导的小鼠淋巴细胞增殖能力,增加 HC50值,增强小鼠巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数,并显著增加 NK 细胞活性。其作用优于单一玛咖组和单一皂苷组。综上所述，动物实验、体外细胞实验及临床研究表明，西洋参多糖及皂苷对机体的免疫功能具有广泛的调节作用，从而为西洋参及其制剂的临床的广泛应用提供了科学依据。但西洋参成分多样，主要活性成分虽为皂苷和多糖，产生免
19、疫调节作用的机制及复方配伍比例有待深入探索。同时，其西洋参免疫学评价方法还需进一步深入和拓宽。参考文献1任 烨，李厚聪，刘永恒等 .加拿大原产地西洋参多糖提取工艺优化研究J.西南民族大学学报: 自然科学版，2011，37( 6) :940945.2国家药典委员会中华人民共和国药典一部S北京:中国医药科技出版社，2010:122.3马永辉.COLD-FX 对不同状态下小鼠脾细胞免疫调节特性的研究D.石家庄：河北医科大学，2013.4李冀，付雪艳，郝 娴.西洋参多糖类物质研究进展J.中医药信息，2006,23（4）：14。5朴云峰,明 月,李靖涛.西洋参多糖 I、对肝癌细胞 DNA 合成抑制作用的
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