1、大连中汇达科学仪器有限公司共 6 页 第 1 页 食品中三聚氰胺检测方法包一、方法包组件清单二、固相萃取（SPE ）方法三、含量测定 LC-UV 方法四、含量测定 LC-MS 参考方法大连中汇达科学仪器有限公司共 6 页 第 2 页 一、三聚氰胺分析方法包组件清单包括：1、Centurysil C8 色谱柱（4.6*250mm,5m,150A ） 1 支 ￥1800.00 元2、混合型的阳离子交换柱(Cleanert PCX 60mg/3mL)50 支 ￥1200.00 元3、三聚氰胺标准品 1 瓶（500mg，99.5%） ￥120.00 元4、三聚氰胺分析方法手册 1 份 赠送5、庚烷磺酸
2、钠（25g/瓶） ￥800.00 元理化性质三聚氰胺：英文名“melamine” ，简称三胺， 学名三氨三嗪， 别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。分 子 式：C3N6H6、 C3N3(NH2)3 ；分 子 量：126.12物理性能：白色结晶粉末，无毒，无味；相对密度：1570kg/m3 ；熔点：在常压下，354分解；升华温度：300；溶 解 性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳，水溶液呈弱碱性。化学性能：三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料，显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐；在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成
3、三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸；三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物；三聚氰胺与甲醛反应制成树脂，三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料，防火耐热且有很高的稳定性，用于生产塑料、地板砖，厨房用具，防火纤维，商业滤膜，胶水和阻燃剂。大连中汇达科学仪器有限公司共 6 页 第 3 页 二、固相萃取(SPE)方法1 固相萃取(SPE)柱的选择：三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物)，净化过程一般选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯（PEP）吸附剂上，具有阳离子和反相两种吸附机理，并具有以下优点：1) 可通过两种不同溶液的洗涤(水/一
4、定 pH 值的缓冲溶液和有机溶剂)，使样品更干净，提高检测的灵敏度。2) 批次重复性好。3) 回收率高，重现性好，即使小柱跑干也可以得到较高回收率。2 样品前处理步骤：2.1 标准样品配制：取 50mg 三聚氰胺标准品，以 20%甲醇溶解定容至 50mL 得到 1000ppm 的标准溶液，使用时，以提取液(1%三氯乙酸)稀释至所要的浓度。2.2 提取：称取饲料/奶粉样品 5g (或牛奶 10ml)，加入 50ml 1%三氯乙酸提取液，充分混匀，加入 2mL 2%乙酸铅溶液，超声 20min。然后取部分溶液转移至 10mL离心管中，8000rpm/min 离心 10min，取上清液 3mL 过混
5、合型阳离子交换小柱(PCX)。大连中汇达科学仪器有限公司共 6 页 第 4 页 2.3 净化(PCX 小柱，60mg/3mL) ：1) 活化及平衡：3mL 甲醇，3mL 水2) 上样：加入提取液 3mL3) 淋洗： 3mL 水；3mL 甲醇；弃去淋洗液并将小柱抽干。4) 洗脱： 5mL 5%氨化甲醇(v/v) 洗脱。(5%氨化甲醇的配制： 5mL 氨水+95mL 甲醇)。5) 浓缩： 50，氮气吹干，20%甲醇/水定容至 2mL。2.4 检测：用 HPLC-UV 中国农业部颁标准检测方法分析，测得 PCX 柱的回收率结果如下：添加水平（mg/L） 回收率0.01 116%0.1 108%0.5
6、 92%2 96%由上表可以看出：用 PCX 柱净化样品，可以得到满意的回收率。三、HPLC-UV 检测方法三聚氰胺在传统的 C18 柱上保留很差，需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离，按照美国食品药品监督管理局（FDA）的三聚氰胺检测方法和中国农业部颁部的三聚氰胺检测方法，采用中汇达 Centurysil 系列亲水色谱柱,均能得到良好的结果，分析色谱图如下：1、 三聚氰胺的 FDA 检测方法色谱柱：Centurysil C8 4.6250mm缓冲液：10mM 柠檬酸，10mM 辛烷磺酸钠，调 pH 为 3.0。流动相：缓冲液：乙腈=85：15进样量：样品用缓冲液溶解成约 0.1mg
7、/mL，进 10uL流 速：1.0mL/min大连中汇达科学仪器有限公司共 6 页 第 5 页 柱 温：40 波 长：240nm2、三聚氰胺的中国农业部颁标准检测方法色谱柱：Venusil ASB-C18 4.6250mm缓冲液：10mM 柠檬酸, 10mM 庚烷磺酸钠流动相：缓冲溶液:乙腈=85:15进样量：样品用缓冲液溶解成约 0.1mg/mL，进 10uL流 速：1.0mL/min柱 温：40波 长：240nm大连中汇达科学仪器有限公司共 6 页 第 6 页 四、LC-MS 参考方法由于 HPLC-UV 方法中，流动相添加了离子对试剂，限制了液质联用方法的使用；但不用离子对试剂色谱方法，
8、三聚氰胺在传统的 C18 柱上保留很差，没有良好的保留与分离。源于此问题，中汇达公司开发了新的方法，采用 Centurysil 系列色谱柱，不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离，参考方法如下：缓冲液：10mM NH4AC流动相：缓冲液：ACN=95：5流 速：1.0mL/min进样量：先用 70%ACN 溶解成约 1mg/mL，用 ACN 稀释成 0.1mg/mL，进 10uL柱 温：40波 长：240nmC8 4.6250mm (Rt=3.839min;TF(5%)=1.00 C18 4.6250mm (Rt=3.651min;TF(5%)=1.05)大连中汇达科学仪器有限公司地址：大连市甘井子区西南路芳茗园 1 号 邮编：116023电话：0411-8 6732112 86732113 83023001 82923002传真：0411-8 6732114 E-mail：
