植物转基因技术原理及要点 李琳玲1. 技术路线 目的基因分离 植物表达载体的构建 受体材料的准备 遗传转化 转化组织 组织脱分化 转化植株筛选 炼苗 1. 目的基因的分离 v （1 ）已知基因的获得 v 化学合成法 v PCR 扩增 v （2 ）未知基因的获得 v 构建基因组文库，筛选目的基因 v 构建cDNA 文库，筛选目的基因 v mRNA 差异显示技术筛选差异表达基因 v 差异蛋白质谱表达技术筛选功能基因 v pGEM-T 银杏叶 银杏叶RNA RNA 提取 提取 反转录cDNA chs 全长cDNA 的克隆 TA 克隆及测序 向chs 两端引入酶切位点 双酶切 定向克隆 导入农杆菌 2. 植物表达载体的构建例 pBI121-chs 构建 pBI121 图谱银杏chs 基因植物表达载体构建示意图 chs -glucuronidose NOS ter CaMV35 P chs3. 受体材料的准备 v 细胞的全能性：分化细胞脱分化 再分化 4. 遗传转化 v （1 ）间接转化法农杆菌介导转化法 v （2 ）直接转化法 v A 、 基因枪转化法 v B 、 电击法 v C 、花粉管通道
