实验三 琼脂糖凝胶电泳技术的 原理和方法 主讲教师和实验员：张运峰一 实验目的 n 学习琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理和方法 n 检测碱裂解法提取质粒的结果 n 检测双酶切法鉴定重组质粒的结果（后续实验） n 检测PCR法鉴定质粒的结果（后续实验）二 实验原理 （1 ）某物质 在电场 作用下的迁移速度叫做电 泳的速率，电 泳的速率与 核酸分子大小和构型有关。 DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动 。分子质量越小跑得越快，紧密构型快于松散型开环分子或线性分子， 从而可以分离大小不同的DNA或RNA分子。 （2）琼脂糖是一种线性多糖聚合物，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶 孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。浓度越高，孔隙越小，其分辨能力 就越强。琼脂糖浓度 琼脂糖浓度 (%) (%) 线型 线型 DNA DNA 分子的分离范围 分子的分离范围 (Kb) (Kb) 0.3 0.3 5 5 60 60 0.6 0.6 1 1 20 20 0.7 0.7 0.8 0.8 10 10 0.9 0.9 0.5 0.5 7 7 1.2 1.2 0.9 0.9 6 6 1.5 1.5 0
