1、人核转录因子-B亚基p65亲和肽酶联试剂盒使用操作步骤检测范围： 96T100ng/L 2400ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中核转录因子-B 亚基p65 亲和肽(NF-B p65)的活性。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人核转录因子-B 亚基p65 亲和肽(NF-B p65)水平。用纯化的人核转录因子-B 亚基p65 亲和肽(NF-B p65)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入核转录因子-B 亚基p65 亲和肽(NF-B p65)，再与HRP 标记的核转录因子-B 亚基p65 亲和肽(NF-B p65)抗体结合，形成抗体-抗原-酶
2、标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的核转录因子-B 亚基p65 亲和肽(NF-B p65)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人核转录因子-B 亚基p65 亲和肽(NF-B p65)浓度。试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液 20ml1 瓶 7 终止液 6ml1 瓶2 酶标试剂 6ml1 瓶 8 标准品（4800 ng/L） 0.5ml1 瓶3 酶标包被板 12 孔8 条 9 标准品稀释液 1.5ml1 瓶4 样品稀释液 6ml1 瓶 10 说明书
3、 1 份5 显色剂A 液 6ml1 瓶 11 封板膜 2 张6 显色剂B 液 6ml1/瓶 12 密封袋 1 个标本要求1标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融2不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。2400ng/L 5 号标准品 150l 的原倍标准品加入150l 标准品稀释液1200ng/L 4 号标准品 150l 的5 号标准品加入150l 标准品稀释液600ng/L 3
4、 号标准品 150l 的4 号标准品加入150l 标准品稀释液300ng/L 2 号标准品 150l 的3 号标准品加入150l 标准品稀释液150ng/L 1 号标准品 150l 的2 号标准品加入150l 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50l，待测样品孔中先加样品稀释液40l，然后再加待测样品10l（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37温育30 分钟。4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备
5、用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50l，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50l，再加入显色剂B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。操作程序总结：计算以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓
6、度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（n5）。5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物请避光保存。7严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1试剂盒保存：；2-8。2有效期：6 个月。
