暨 南 大 学 医 学 院 生物化学教研室 费 嘉 细胞复苏与冻存 一、细胞冻存 在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内、外 环境中的水都会形成冰晶，导致细胞内发生机械 损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH改变 、蛋白变性等，引起细胞死亡。 在培养液中加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢 的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细 胞。 目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）。 DMSO的常用浓度为5%-10%。 添加DMSO保护剂的细胞在液氮中冻存1-2年 ，存活率可达80%-90%。 DMSO液需预先用培养液配好，避免因临时配 制产热而伤害细胞。试剂和器材 器材：液氮罐、冻存管（塑料螺口专用冻 存管或安瓿瓶，2 ml）、离心管、吸管、 离心机等 试剂：含保护剂的培养基（即冻存液） 操作步骤： 1、消化细胞，收集细胞悬液。 2、离心，1000 rpm 10 min，弃上清液。 3、沉淀加冻存液，计数，调整至510 6 /ml左右 。 4、将悬液分至冻存管中，每管1 ml。 5、封口 6、标注 标明细胞种类、冻存日期。 7、梯度降温：室温 4（20分钟）冰箱 冷冻室（30分钟） 低温冰
