三细胞骨架标本的制备及观察.PPT

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1、实验三实验三 细胞骨架标本的制备及观察细胞骨架标本的制备及观察 一、实验目的一、实验目的 1. 掌握细胞骨架的显示方法的原理。 2熟悉光学显微镜下细胞骨架的基本形态结构。 3. 了解细胞骨架标本的制备方法。二、实验材料二、实验材料 洋葱鳞茎、光学显微镜、水浴箱、载玻片、盖玻洋葱鳞茎、光学显微镜、水浴箱、载玻片、盖玻片、吸管、培养皿、青霉素小瓶、镊子、剪子、片、吸管、培养皿、青霉素小瓶、镊子、剪子、擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、 pH7.2 PBS(无钙镁磷酸缓冲液)、(无钙镁磷酸缓冲液)、 pH6.5 PBS、 M-缓冲液缓冲液( 10原液)、原液)、 1%

2、TritonX-100、 2%TritonX-100、 3%戊二醛液、戊二醛液、 0.2%考马斯亮兰染液。考马斯亮兰染液。三、实验原理 细胞骨架是真核细胞内由蛋白质纤维构成的网络结构。当用适当浓度的 TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚,是一种非离子去垢剂)处理细胞时,可将质膜中及细胞内许多蛋白质溶解,而细胞骨架系统的蛋白质却不被破坏,经固定和考马斯亮兰(非特异性蛋白质染料)染色后,可使细胞骨架蛋白着色而显示骨架显微结构。由于骨架系统中有些纤维(如微管)在该实验条件下不够稳定,而有些类型的纤维太细,在光镜下无法分辨,因此显示看到的主要是微丝组成的微丝束。采用活体染色等方法制备细胞骨架标本

3、,加强动手能力和了解临时制片的方法。四、实验方法 1. 洋葱鳞茎表皮细胞细胞骨架标本制备 ( 1) 撕取约 55mm大小的洋葱鳞茎中层鳞片的内表皮,浸入 pH6.5 PBS中 5min后,再放入盛有2%TritonX-100液的小瓶中, 37 处理 20 30min,以溶解掉细胞骨架以外的蛋白质。 ( 2) 用吸管吸尽 2%TritonX-100液,加入 M-缓冲液洗涤 2 3次,每次 5min,以使细胞骨架稳定。 四、实验方法 ( 3) 吸弃 M-缓冲液,加人 3%戊二醛固定液,固定 10min,再用 PBS洗 2 3次,每次 3min。 ( 4) 吸尽缓冲液,加 0.2%考马斯亮兰染液,染色 8 10min,再用 PBS洗 2 3次,每次 3min。 ( 5) 取出洋葱鳞茎表皮,平展于载玻片上,盖上盖玻片即可观察。五、结果与分析 光镜下可见洋葱鳞茎表皮细胞的胞质着色极淡,其中被染成深蓝色的网状结构即为细胞骨架 微丝 ,有的细胞中在核的周围还可见有些放射状分布的细丝。六、作业 1. 细胞骨架显示方法的原理是什么? 2. 绘制细胞骨架显微图。

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