思考1 分离生物大分子的基本思路是什么？ 选用一定的物理或化学的方法分离具有 不同物理或化学性质的生物大分子。 思考2 蛋白质的分离和提取的原理是什么？ 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小 、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和 对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白 质。一、基础知识： 凝胶色谱法（分配色谱法）： 1、概念：根据被分离物质的蛋白质相对 分子质量的大小，利用凝胶的分子筛作用， 来进行分离。2、原理：当不同的蛋白质通过凝胶时，相 对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内 部的通道，路程较长,移动速度较慢。 分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部 的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短, 移动速度较快,相对分子质量不同的蛋白质 因此得以分离。 大分子通过凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快 小分子穿过凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液， 促使蛋白质分子的差速流动。 混合物 上 柱 洗 脱 大分子流动快 小分子流动慢 收 集 大分子 收 集 小分子 2、缓冲溶液的配制 通常由12种缓冲剂溶解于水中配制而 成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得不
