一、实验目的 通过本实验让学生掌握质粒DNA 双酶切的 原理和操作方法二、实验原理 限制性内切酶是一类能识别双链DNA 分子特异性核酸序列的DNA 水 解酶。每一种内切酶能识别DNA 分子中由46个核苷酸组成的特定序 列 多种细菌能合成限制性内切酶，这是它们保护自己，降解外来DNA 分 子的重要手段。细菌细胞内的DNA 由于相应序列上的A 或C 碱基的甲 基化而不被限制性内切酶攻击，而外源DNA 一旦进入细胞则立即被识 别，双股DNA 螺旋都被切断，这种现象被称为寄主控制的限制与修饰 现象 限制性内切酶是体外剪切基因片段的重要工具，常常与核酸聚合酶、 连接酶以及末端修饰酶等一起称为工具酶 限制性内切酶按限制酶的组成、与修饰酶活性关系以及切断核酸的情 况不同，分为三类：型、型和型 型限制性内切酶能识别专一的核苷酸顺序，并在识别点附近的一些核苷酸上 切割DNA 分子中的双链，但是切割的核苷酸顺序没有专一性，是随机的。这类 限制性内切酶在DNA 重组技术或基因工程中用处不大，无法用于分析DNA 结 构或克隆基因。这类酶如EcoB 、EcoK 等 型限制性内切酶能识别专一的核苷酸顺序，并在该顺
