精选优质文档-倾情为你奉上蛋白浓度测定BCA法测定样品蛋白的浓度1、原理：在碱性环境下，蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+ 络合，将Cu2+还原成Cu+。BCA 试剂可敏感特异地与Cu+结合，形成稳定的有颜色复合物。在562nm处有高的光吸收值，颜色的深浅与蛋白浓度呈正比。通过制备经过梯度稀释的、浓度抑制的一组蛋白质标准品，然后将其与未知浓度的待测蛋白质仪器检测，根据绘制出的标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。2、准备：96孔板、枪（枪头）、酶标仪（提前开启）、Pierce的BCA蛋白定量分析试剂盒、PBS、蛋白标准品（-20分装保存）、PBS缓冲液、待测蛋白样品。注意：蛋白标准品有两种：一种是BCA试剂盒原装蛋白标准品（2mg/ml），另一种是10mg/ml蛋白标准品，需要稀释到2mg/ml。3、操作步骤：准备1ml RIPA裂解液：加100l phosstop、10l cocktail和10l PMSF到 880l 1X RIPA buffer中，混匀后置于4中备用。（若蛋白提取完后直接进行蛋白定量，则可直接用剩余的裂解液。
