1、闪式与回流提取动物药美洲大蠊总氨基酸的工艺比较吴红梅 1，李晨晨 1，刘楠 1，周文杰 1，欧水平 1，杨明 1,2*(1成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室，成都 611137；2江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室，南昌 330004)摘要 目的:考察闪式与回流提取对美洲大蠊总氨基酸提取工艺的影响。方法:以美洲大蠊总氨基酸提取率作为考察指标，采用紫外分光光度法，考察闪式与回流提取对美洲大蠊总氨基酸提取工艺的影响。结果:闪式提取所得美洲大蠊总氨基酸含量与回流提取基本一致。结论:闪式提取美洲大蠊总氨基酸不仅提取率高，而且省时、节能，可望在动物类药材提取中广泛地应用。关键词 闪式提取;
2、美洲大蠊;总氨基酸;提取工艺Comparion of Smashing and Reflux Extraction Process for Total Amino Acid in Periplaneta AmericanaWU Hong-mei1,LI Chen-chen1,LIU Nan1,ZHOU Wen-jie1,OU Shui-ping1,YANG Ming1,2*(1.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of
3、 Chinese herbal medicines，Chengdu 611137，China；2. Key Lab for Modem Preparation of Traditional Chinese Medical，Ministry of Education of China； Jiangxi College of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，China)Abstract Objective: To study smashing and reflux extraction of total amino acid in Peri
4、planeta Americana. Method: UV-vis was developed for the rate of extraction of total amino acid as assessment indices in Periplaneta americana. Result: The content of total amino acid in Periplaneta Americana of smashing extraction was basically the same with reflux extraction. Conclusion: Smashing e
5、xtraction method for total amino acid in Periplaneta Americana can save time，working and energy，and it is hoped to be widely used in animal medicine. Key words smashing extraction; Periplaneta Americana; total amino acids; extraction process 美洲大蠊为蜚蠊科昆虫美洲大蠊（Periplaneta americana L ）的干燥虫体。是一味药用历史悠久的中药
6、，始载于神农本草经，列为中品 1，具有破瘀，化积，解毒，消肿之功效。近年来的研究发现，美洲大蠊含有大量的氨基酸、多肽、微量元素等活性成分,并以其为原料开发出“康复新液”、“心脉龙注射液”、“ 消症益肝片”等系列制剂。但目前制剂生产过程中，美洲大蠊药材有效成分总氨基酸的提取方法通常采用热回流提取，缺乏对蛋白类等热敏性成分易被破坏及耗时、耗能等方面的考虑；同时闪式提取器具有不加热、省时、节能等特点，目前主要应用集中在植物药的有效成分提取方面 2-6，而极少应用于含蛋白类等热敏性成分较多的动物药方面，更未见应用于美洲大蠊的研究报道。本文通过比较闪式与回流提取对美洲大蠊总氨基酸提取率的影响，选择更适宜
7、的提取方法，为药厂的实际生产提供参考。1 仪器与试剂岛津紫外分光光度仪（UV-1700）；自动双重纯水蒸馏器SZ-93 (上海亚荣生化仪器厂)；闪式提取控制器JHBE-50S(河南金鼐科技发展有限公司)。丙氨酸标准品（140680-201002）由中国药品生物制品检定所提供，其余所用试剂均为分析纯。水为重蒸水。美洲大蠊药材（四川科伦天然药业有限公司 批号：101201） ，经成都中医药大学药学院中药鉴定教研室裴瑾教授鉴定，为蜚蠊科昆虫美洲大蠊的干燥全体。2 方法与结果2.1 对照品溶液的制备 精密称取丙氨酸对照品15.84 mg，置100 mL量瓶中，加10%异丙醇溶液适量，使其溶解，并稀释至
8、刻度，摇匀。精密量取5 mL，至50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。2.2 标准曲线的绘制 精密量取标准溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，分别置l0 mL量瓶中，各加水使成2.5 mL，精密加入柠檬酸缓冲液（ph=5.0）1 mL，1%维C溶液（新鲜配制）收稿日期 2012-2-16第一作者 吴红梅，在读博士，研究方向：中药新剂型、新制剂，Tel：15351218738。E-mail：381176659 通讯作者* 杨明，教授，博士，从事中药新制剂新技术研究，Tel：028-61800127。E-mail：0.l mL，茚三酮乙醇溶液3 mL，摇匀，置100水浴中加热
9、15min，取出，迅速冷却至室温，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。照分光光度法（中国药典2010年版一部附录V）试验，于570 nm处测定吸收度，以进样量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程： A=0.0228x+0.0107(r=0.9999)：表明丙氨酸在7.9239.6 g，与吸光度呈良好的线性关系。2.3 提取方法2.3.1 回流提取法 取美洲大蠊药材约 25 g，精密称定，加 10 倍量 85%乙醇，加热回流提取 3 次，每次 1 h，合并提取液，过滤，将滤液置 1000 mL 容量瓶中，用 85%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得提取液。2.3.2 闪式提取法 取美洲大蠊
10、药材约 25 g，精密称定，加 10 倍量 85%乙醇闪式提取 3 次，每次 1 min，合并提取液，过滤，将滤液置 1000 mL 容量瓶中，用 85%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得提取液。2.4 供试品溶液的制备 分别 精密吸取“2.3”项下的提取液 4 mL，至 10 mL 量瓶中，用85%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液1.5 mL，照“2.2”项下方法，重复测定六次，记录吸光度，计算得RSD为0.07%。2.6 稳定性试验 精密取同一份供试品溶液，照“2.2”项下方法显色，分别于0,15,30,45,60 min进行测定，记录吸光度，计算得RSD为0.3
11、1%。2.7 重复性试验 精密吸取同一批次提取液六份，按“2.4”项下制备样品供试液，照“2.2”项下方法测定吸光度，计算含量，其RSD为0.94%。2.8 加样回收率试验 取已知含量的提取溶液(148.5 g.mL -1)6份，分别精密加158.4 g.mL -1的丙氨酸对照品溶液1,1,2,2,3,3 mL，至10 mL量瓶中，按“2.4”项下制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液1 mL按“2.2”项下条件分别进行测定，计算平均回收率为102.15% ，RSD为2.03%。结果见表1。表1 美洲大蠊丙氨酸加样回收率试验测定结果No 取样量/mL 样品中含量/g 加入对照品量/g 测得量/g
12、回收率/% 平均值/% RSD/%1 158.4 461.36 103.762 158.4 458.64 102.053 2.0 297 316.8 628.41 104.61 102.15 2.034 316.8 610.72 99.035 475.2 774.89 100.576 475.2 785.93 102.892.8 样品测定 分别取 5 份美洲大蠊药材约 25 g，精密称定，按照“2.3”项下制备提取液，将提取液按“2.4”项下制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液 1 mL 按“2.2”项下测定美洲大蠊中总氨基酸的吸光度，利用外标一点法求出总氨基酸含量，结果见表 2。表 2 样品含
13、量测定结果(n3)提取方法 含量/(mg.g -1) 平均值/(mg.g -1) 闪式提取液 5.63 5.69 5.65 5.56 5.77 5.66回流提取液 5.69 5.87 5.71 5.65 5.84 5.75试验结果表明，闪式提取和回流提取工艺的美洲大蠊中总氨基酸的含量基本一致，无显著性差异。3 讨论美洲大蠊中氨基酸含量较高，种类齐全，氨基酸作为合成各种具有重要功能分子的必需前体物，具有调节免疫、调节代谢等独特功能 7,同时文献报道回流提取美洲大蠊的总氨基酸含量较超声及索氏提取的提取率高 8，并且在实际生产过程中也采用回流提取美洲大蠊药材进行工业生产，因此本文比较闪式提取与回流提
14、取对美洲大蠊总氨基酸含量的影响，而这两种提取方法所得提取物中其他成分有无差异，有待进一步研究。本文首次将闪式提取器应用于动物药美洲大蠊总氨基酸的提取工艺中。虽然研究数据显示闪式提取所得总氨基酸含量稍低于回流提取，但统计学上无显著差异，与药厂生产中采用的加热回流提取时间长、操作繁琐、能耗高相比，闪式提取具有省时、节能等优点，并且对动物药来说，闪式提取无疑是一种避免蛋白类等热敏性成分被破坏的新方法。参考文献1 孙星衍.神农本草经M.北京:商务印书馆,1955:902 赵强强,韩丽,熊永爱,等.闪式与回流提取黄芪皂苷工艺比较J.中国实验方剂学杂志,2010,16(13):1-3.3 刘振洋,刘延泽,
15、刘改岚,等.绞股蓝总皂苷的闪式提取和纯化工艺研究J.中草药,2009,40(7):1071-1073.4 刘延泽.植物组织破碎提取法及闪式提取器的创制与实践J.中国天然药物,2007,5(6):401-407.5 吴冬梅.闪式提取器在中药研究中的应用J.中国实验方剂学杂志,2006,12(7):34,37.6 邓引梅,崔永明,李唯,等.响应面法优化闪式提取甘草叶总黄酮工艺研究J.化学与生物工程,2008,25(9):44-47.7 孔祥峰,印遇龙,伍国耀.猪功能性氨基酸营养研究进展J.动物营养学报，2009,21(1):1-7.8 王玎玮,李海波,蒋学云,等.美洲大蠊药材中总氨基酸提取工艺优化研究J.大理学院学报,2008,7 (12):3-5.
