免疫荧光技术的原 理、分类与应用 2021/12/17免疫荧光技术基本原理 免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显 微示踪的精确性相结合的一项技术 以荧光素作为标记物，与已知的抗体或抗原结合、但不 影响其免疫学特性。然后将荧光素标记的抗体作为标准试 剂，用于检测和鉴定未知的抗原 在荧光显微镜下，可以直接观察呈现特异性荧光的抗原 抗体复合物及其存在的部位。 在实际工作中，由于荧光素标记抗体检查抗原的方法较 为常用，所以一般通称为荧光抗体技术荧光的产生 物质吸收外界能量进入激发状态，再 回到稳定基态时，多余的能量会以电 磁辐射的形式释放，即发出荧光，这 类物质被称为荧光素。 由光激发所引起的荧光，为光致荧光 荧光免疫技术 由化学反应引起的荧光，为化学荧光 化学荧光技术荧光素的荧光特性 停止供能，荧光现象随即终止 对光的吸收和荧光的发射具有高度的选择 性 发射光的波长入射光波长 荧光效率： 发射荧光的光量子数 荧光效率= 吸收光的光量子数 荧光淬灭现象：荧光素的辐射能力减弱合适荧光素的选择 具有与蛋白质形成共价键的化学基团 荧光效率高，标记后下降不明显 荧光与背景的色泽对比鲜明 标
