实验中常用蛋白检测方法ppt课件.pptx

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资源描述

蛋白的检测方法Western Blot 免疫荧光 ELISA 免疫组化Western Blot 原理:经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到 PVDF膜上(以非共价键形式吸附蛋白质,且 能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性 不变)。以固相载体上的蛋白质或多肽作为 抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或 同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显 色、化学发光或放射自显影以检测电泳分离 的特异性目的基因表达的蛋白成分。 特点:组织、细胞来源均可;半定量 原理:抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应 使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组 织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。 特点:是融合了免疫学原理(抗原抗体特异性结合)和组织学技术(组 织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等),通过化学反应使标记 抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色,来对组织(细胞 )内抗原进行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。样本是细胞或组 织,要在显微镜下观察结果,可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。 免疫组化/免疫荧光 原理:酶联免疫法

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