1、 1 马伊氏锥虫 酶联免疫 分析 （ ELISA） 试剂 盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 药品名称： 通用名： 马伊氏锥虫 酶联免疫 分析 试剂盒 使用目的： 本试剂盒用于 定性 测定 马 血清，血浆 及 相关 液体 样本 中 伊氏锥虫 。 实验原理 本试剂盒 采 用 间接 法测定 标本 中 马伊氏锥虫 。用纯化的 伊氏锥虫 抗 体 包被微孔板，制成固相抗 体 ， 与样品中 伊氏锥虫 温育后，加入生物素 标记 的 抗 IgG 抗体 ， 再与 链霉亲和素 -HRP结合，形成 免疫 复合物 ，经过彻底洗涤后 加 底物 TMB 显色。 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转
2、化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值） ，与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中 马伊氏锥虫 的存在与否。 ， 试剂盒组成 1 20 倍浓缩洗涤液 50ml 1 瓶 8 样品稀释液 6ml 1 瓶 2 链霉亲和素 -HRP 6ml 1 瓶 9 阴性对照 0.5ml 1瓶 3 酶标包被板 12 孔 8 条 10 阳性对照 0.5ml 1瓶 4 生物素标记的抗 -IgG 抗体 6ml 1 瓶 11 密封袋 1 个 5 显色剂 A 液 6ml 1 瓶 12 封板膜 3 张 6 显色剂 B 液 6ml 1/瓶 13 说明书 1 份 7 终止液 6ml 1 瓶 标本要
3、求 1 不能检测含 NaN3 的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性。 2 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可 将标本放于 -20保存，但 应避免反复冻融 操作步骤 1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔 、 阳性对照 2 孔、空白对照 （不加样品，生物素标记的抗 -IgG 抗体， 链霉亲和素 -HRP，其余操作相同 ） 1 孔 2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50l。然后在 待测样品孔 先加样品稀释液 40l，然后 再加待测样品 10l。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽
4、量不触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀 ， 37温育 45 分钟。 3. 配液： 将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用 4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 4 次，拍干。 5. 加 生物素标记的 抗 -IgG 抗体 ：每孔加入 生物素标记的 抗 -IgG 抗体 50l（空白孔除外） 。2 37温育 30 分钟 6. 洗涤：操作同 4。 7. 加 链霉亲和素 -HRP：每孔加入 50l 的链酶亲和素 -HRP（空白孔除外） ，轻轻振荡混匀，37温育 30 分钟。 8. 洗涤：操作同 4。 9. 显色：每孔先加入显色剂 A 50l
5、，再加入显色剂 B 50l，轻轻震荡混匀， 37 避光显色15 分钟 . 10. 终止： 每孔加终止 液 50l， 终止反应 （此时蓝色立转黄色） 。 11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的 吸光 度（ OD 值） 。 测定应 在加终止液后 15 分钟以内进行 。 结果判定： 试验有效性：阳性对照孔平均值 1.00; 阴性对照平均值 0.10 临界值（ CUT OFF）计算：临界值 =阴性对照孔平均值 +0.15 阴性判定：样品 OD 值 临界值（ CUT OFF）者为 马伊氏锥虫 阴性 阳性判定： 样品 OD 值 临界值（ CUT OFF）者为 马伊氏锥虫 阳性 注意事
6、项 1操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。 2试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 3 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水 浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。 4 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 5底物请避光保存。 6试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm 7所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终 止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。 规格 ： 96 人份 /盒 保存条件及有效期 1 试剂盒保存： ； 2-8 。 2有效期： 6 个月
