1、项目名称： 基于“肝藏血主疏泄”的脏象理论研究首席科学家： 王庆国 北京中医药大学起止年限： 2011.1至 2015.8依托部门： 国家中医药管理局二、预期目标本项目的总体目标：1、系统梳理肝藏血主疏泄的脏象理论，澄清其历史源流，明确理论的含义、内容及相互关系，发展与创新肝脏象理论，探索脏象学说及中医理论发展与创新的新模式。 2、确立肝藏血主疏泄功能异常的主要宏观表现及微观指标，建立肝藏血主疏泄功能异常状态的判别模式。 3、阐释肝藏血主疏泄功能的生理调控机制，分析肝藏血与主疏泄间的关联网络。 4、揭示从肝论治临床疗效产生的机制和规律。 5、阐释肝藏血主疏泄在神经内分泌免疫网络中特异的功能区域
2、、传导通路以及特异的反应状态，揭示肝藏血主疏泄的基本科学内涵。 五年预期目标: 1.阐明肝藏血主疏泄的基本含义、学说内容及两者间的关系。阐明肝藏血主疏泄的应用范围与原则。 2.澄清肝藏血主疏泄理论的演变史，探索适合脏象学说及中医理论发展与创新的新模式。 3、编制健康人群调查量表，完成 300例正常健康人四时八节的动态追踪调查研究；120 例健康志愿者两种应激状态前后的比较研究。建立肝藏血主疏泄调控机体的状态判别模式，探讨肝藏血与主疏泄的内在调控机制及内在相关性。4、完成 100只大鼠、20 只树鼩四时八节的动态研究。5、完成 100例月经规律的健康志愿者月经周期观测及应激反应测试。6、完成 1
3、20例健康志愿者两种应激状态前后的比较研究。建立肝藏血主疏泄调控机体的状态判别模式，探讨肝藏血与主疏泄的内在调控机制及内在相关性。7、编制四种疾病的临床调查量表，完成每种疾病各 800例以上的临床横断面调查；建立肝藏血主疏泄功能异常状态的判别模式。8、完成临床观测与干预，五种疾病各 300例；揭示五种疾病从肝论证的机制和证治规律。9、建立 4-8种可反映肝藏血主疏泄功能异常状态的抑郁症等 5种疾病的病证结合动物模型及其判别方法。10、完成动物模型功能区神经元活性、血管反应性、肠敏感性、内分泌腺体反应性等功能测定、化学物质的含量变化、化学物质的反馈作用等相关指标的检测，完成关键组织部位的基于测序
4、技术的转录组（数字基因表达谱） 、小RNA分析；完成不少于 20个关键分子的 mRNA及蛋白质水平的验证；完成关键分子相关调控网络的分析，揭示出与肝藏血主疏泄功能密切相关的共性分子网络。 11、完成养血调肝方对抑郁症等 5种疾病的反证及该方对肝藏血主疏泄功能密切相关的共性分子网络的作用机制研究；完成实质性肝损伤对肝藏血主疏泄功能密切相关的共性分子网络影响的研究。 12、完成相关各项数据分析及挖掘；完成信息管理系统的平台建设；建立基于熵理论分析方法与隐结构分析方法的应用规范。 13、发表相关学术论文 300篇左右，其中 SCI 20篇左右，出版相关学术著作 2部。 14、培养博士研究生 50名，
5、硕士研究生 80名，博士后 6名；形成多学科交叉、中青年为主的创新性研究梯队。三、研究方案1、以肝藏血主疏泄为核心的肝脏象理论研究本项目应用历史分析的方法进行中医理论研究。即采用知识考古学等思想史研究思路与中医传统文献方法结合，系统梳理从先秦时期到新中国成立前历代中医及相关文献，以肝主疏泄为切入点，分析肝主疏泄及相关专题的对象形成、陈述方式、概念的扩散、主题策略的选择等内容，对文献中肝藏血主疏泄应含义及其诊治体系生成变化进行具体分析，以发现构成某一时期医学思想整体的深层结构“知识型”或“基本信码” ，也就是话语，根据话语的转变来分析肝藏血主疏泄应含义及其诊治体系的演变及背后的原因，以分析其形成
6、和转变的历史；在肝藏血主疏泄及其相关理论学术发展史的基础上，确立其理论内涵、应用范围与原则，论证其在脏象学说、脏腑辨证以及临床各科疾病诊治中的地位与作用，解决学术分歧与争议。1.1 肝藏血主疏泄及其相关理论的知识考古学研究话语构成分析：应用知识考古学，对文献中肝藏血主疏泄及其相关研究单元进行话语构成分析，分别对肝藏血主疏泄及其相关研究单元在辨证论治体系中进行对象形成、陈述方式、概念扩散、主题从属等话语构成的四要素分析。即：历代医学文献中肝藏血主疏泄对象的形成，也就是在诊治过程中应用肝藏血主疏泄疾病范围的确定、肝藏血主疏泄病症之间的划分方法；肝藏血主疏泄在诊治体系中陈述方式，即肝藏血主疏泄以什么
7、方式、与哪些概念、以什么次序关系出现在诊治体系中；肝藏血主疏泄的界定，即在诊治体系中，在肝藏血主疏泄与肝藏血主疏泄等其它概念、学说的相互关系中，肝藏血主疏泄是怎样被界定的；肝藏血主疏泄的从属的主题，即肝藏血主疏泄是在论述什么问题时才出现。话语转型分析：分析肝藏血主疏泄及其相关研究单元知识型的断裂点，确定其话语形成系统的成分转换、话语形成体系特征性的关系转换、各种不同话语形成规则之间的转换、各种实证性之间的关系的转换。1.2 肝藏血主疏泄及其相关理论学术发展史的确立在肝藏血主疏泄及其相关理论等的关系中确定肝藏血主疏泄的含义与应用范围、应用原则，并在肝藏血主疏泄临床适用范围改变的基础上确立其学术的
8、演变史；阐明其所在诊治体系的构成要素、诊断和治疗原则、处方原则及其从一个时期到另一个是其转换的历史。1.3 肝藏血主疏泄理论内涵的确定在肝藏血主疏泄及其相关理论学术发展史的基础上，确立其理论内涵、应用范围与原则，论证其在脏象学说、脏腑辨证以及临床各科疾病诊治中的地位与作用，解决学术分歧与争议。2、生理状态下肝藏血主疏泄功能的调控机制研究2.1 依据现代文献提取的信息，编制半开放式健康人群调查他评量表。遵循临床流行病学抽样调查的相关各项要求，依据 2005年全国 1%人口抽样调查资料数据，在全国多家医院的体检中心、学校及社区，开展体检无器质性病变中青年人群 300例（男：女=1：1）动态追踪调查
9、，分别在一年四时八节（立冬、冬至、立春、春分、立夏、夏至、立秋、秋分） ，分时间段从躯体症状、情绪、生活质量、生活事件、相关指标（生命特征、体质体能、血常规、一滴血、虹膜仪、脉象仪、舌象仪、面色分析仪、神经递质、退黑素等）及一般情况等信息，建立数据库。 2.2采用方差分析、秩和检验等统计方法，分析宏观表现及微观指标的关联性；在不同季节的差异性；以及随季节变化的动态规律。 2.3 应用隐结构模型对调查数据库进行多维样本聚类分析，由计算机自动搜索对调查人群进行分类，分析其中与肝藏血主疏泄状态相关的人群，而后提取该人群的特征性症状与指标，建立肝藏血主疏泄功能状态的判别模型。 2.4动物四时八节的动态
10、观测选取 W大鼠 100只，树鼩 20只，根据北京市气象局气象科学研究所提供。2011年 1月-2016 年 1月 5年的四时八节的气候参数：包括日照百分数、平均温度、日温差、平均气压、日降水量、平均风力、平均相对湿度、平均湿度/平均温度共 8项。分别选取四时八节（立冬、冬至、立春、春分、立夏、夏至、立秋、秋分）八个时间点，动态观察动物的表征，进行褪黑素、神经递质等多项指标的检测，建立数据库，描述动物四时八节各项指标的动态变化曲线，提取动物状态的核心指标，建立动态变化判别模式，分析肝藏血主疏泄功能与时间节律的相关性。3、健康志愿者应激状态下肝藏血主疏泄功能的调控机制研究3.1妇女月经周期应激研
11、究：选取月经规律的健康志愿者 100人，连续观测其三个月经周期的情绪、躯体症状以及一般性指标的变化，并与月经期、黄体期、月经后期分别进行应激状态测试，主要进行心理认知测试，检测多导脑电等指标，建立数据库进行分析，探索月经周期中肝藏血状态变化与疏泄功能的相关性，并总结肝藏血主疏泄异常状态下应激变化规律，探讨肝藏血主疏泄的内在机制。3.2健康志愿者应激刺激前后不同状态与肝藏血主疏泄关系的研究：选取120例（男：女=1：1）健康志愿者，采用情绪图片、面孔、音乐、声音、文字和影片等刺激材料，根据研究需要控制其情绪类型以及愉悦度和唤醒度水平。通过自我回忆、材料刺激、社会交互作用等诱发手段使被试处于一定情
12、绪状态。在情绪表达抑制、认知重评、向上和向下情绪调节、情绪分类、内隐情绪任务、快速呈现、视觉掩蔽、线索靶范式、情感启动范式、延迟反应任务、n-back 等经典的实验范式中，综合运用行为学测试、生理多导仪记录、事件相关电位（ERP）和功能磁共振成像（fMRI）等技术手段，从反应时、正确率、ERP 成分的波幅和潜伏期、脑区激活以及脑功能联结等多个方面分析肝脏在情绪产生、调节和情绪与认知相互作用中的地位及相应心理、生理机制。 给予志愿者进行较大强度的运动任务负荷，通过主观报告、问卷调查和客观评分确定和划分研究对象的情绪状态。进行运动前后心理量表评测、视力系统测定、脑电图、脑血流图、肝血流图的检测，以
13、及微循环系统指标的检测，探讨运动前后肝藏血功能的调节机制。并分析藏血与疏泄之间的相关性。4、信息学管理系统及分析方法研究4.1 编写数据库程序，应用现代信息管理学方法，根据研究中文献、临床、实验各项研究数据的特点，编制关联数据库，对相关信息进行统一规范、标示及编码，从而形成统一的数据库录入平台。 4.2针对研究目标及相关研究数据的特点，进行算法研究，完善基于熵理论的数据分析方法及隐结构模型的分析方法，并编写为软件开展网络化运行，为整体项目搭建数据分析平台。4.3应用两种数据分析方法，对四种疾病的临床宏观表现及微观指标进行综合分析，提取与肝藏血主疏泄相关的病证结合下宏观表现与微观表现的共性特点和
14、个性特征。4.4应用两种数据分析方法，对四种疾病提取肝藏血主疏泄相关的病证结合下动物模型的宏观表征与微观指标进行分析，提取其共性特点和个性特征，建立动物模型的判别模式。4.5对项目组脏象研究的各项数据进行综合分析，提炼肝藏血主疏泄的共性生物学基础。4.6 应用信息平台对各项研究进行实时录入、盲法核对及质量监控。5、抑郁症、经前期综合征从肝论治的研究5.1 流行病学调查5.1.1编制调查表。由专家组根据研究目的，通过参考大量文献，充分考虑可行性及有效性，设计抑郁症（轻中度） 、经前期综合征（重度，PMDD）流行病学调查内容，并进行预调查，在此基础上，修改制定研究用调查表。5.1.2开展流行病学调
15、查。应用编制的调查表，对符合上述疾病诊断和纳入标准的患者开展流行病学横断面调查，采集患者的一般个人信息、躯体症状、情绪精神症状、舌象、脉象，并对部分患者进行相关微观指标检测。5.1.3资料整理与分析。建立流行病学研究数据库，对资料进行逻辑检查和处理；运用方差分析、Logist 回归分析等方法，确立肝主疏泄调畅情志功能异常的主要宏观表现及微观指标，建立宏观与微观相结合的肝主疏泄调畅情志功能异常状态的判别模式。5.2 临床疗效研究5.2.1从肝论治抑郁症（轻中度）临床疗效。病例选择 符合中国精神疾病分类方案与诊断标准第 3版（CCMD-）的抑郁症发作诊断标准且中医辨证为肝气郁证、符合纳入标准的患者
16、。分组方法 采用随机数字表将受试者随机分配至方药对证组（自拟方舒郁） 、方药次对证组（自拟方舒郁加减） 。疗程及随访 疗程 8周，对治疗后临床痊愈、显效及有效的患者，治疗后长期随访，观察是否复发。临床疗效评定方法 于治疗前、治疗 1w、2w、4w、6w、8w 末，采用汉密尔顿抑郁量表、临床疗效总评量表、疾病严重程度量表、中医证候积分表、副反应量表进行疗效及副反应评定。5.2.2从肝论治经前期综合征（重度，PMDD）临床疗效。病例选择 符合西医经前期综合征（重度，PMDD）诊断标准且中医辨证为肝气逆证、符合纳入标准的患者。分组方法 采用随机数字表将受试者随机分配至方药对证组（自拟方白香丹） 、方
17、药次对证组（自拟方白香丹加减） 。疗程及随访 疗程2个月经周期，对治疗后临床痊愈、显效及有效的患者，治疗后进行远期随访，观察是否复发。临床疗效评定方法 采用症状严重程度每日报告 、 经前期综合征（重度，PMDD）肝气逆证症状严重程度医生记录表 、副反应量表进行疗效和副反应评定。5.3临床疗效的作用机制5.3.1临床研究脑功能区定位研究 小样本选取健康志愿者，抑郁症（轻中度）肝气郁证患、经前期综合征（重度，PMDD）肝气逆证患者，采用 BLOD-fMRI技术，观察上述研究对象治疗前后相关脑区（激活、抑制）的位点及其数目、强度，并与对照组比较，探讨其脑功能活动区的异同点。定位下的脑功能区血流灌注及
18、相关指标信号检测 利用利用单光子/正电子发射计算机断层显像（SPECT/PET）及磁共振波谱成像（MRS）技术，在研究内容基础上，探查其局部脑血流状态及葡萄糖物质代谢变化，评估其脑功能，揭示抑郁症（轻中度）肝气郁证患、经前期综合征（重度，PMDD）肝气逆证相关脑区功能改变。外周联系途径相关指标变化 检测各组受试对象血浆中相关微观指标，并通过组间及治疗前后对照，比较各组疗效差异，探讨抑郁症（轻中度） 、经前期综合征（重度，PMDD）不同病证的神经体液机制。5.3.2模型动物及离体细胞实验。动物模型造模及评价 经前期综合征（重度，PMDD）肝气逆证大鼠模型：应用情志刺激为主多因素造模法制备经前期综
19、合征（重度，PMDD）肝气逆证大鼠模型。动物模型评价：采集模型动物证候表征进行证候归属评价，检测模型动物生物指标进行疾病归属评价。 动物模型相关脑区定位及定位下的神经机制 进行相应脑区定位并应用脑微透析灌流技术，实时检测去甲肾上腺素（NE） 、5-羟色胺（5-HT）等关键指标水平变化。动物模型外周血及不同脑区关键指标变化特点与关键基因功能验证 检测模型动物相关脑区、外周血中关键生物指标含量，筛选出与经前期综合征（重度，PMDD）肝气逆证密切相关的神经递质和激素。进行模型动物的基因表达谱分析及关键基因的分布、定位及功能验证，筛选其发病及药物干预密切相关靶基因。相关指标的分子机制及其信号转导 取正
20、常大鼠相应部位神经元进行体外培养，用上述病证的人或动物血清、脑脊液处理细胞，免疫荧光和 Western Blot寻找病证相关神经递质或激素的受体及其介导的细胞内信号转导。6、肠易激、高血压、肝硬化三种疾病病证临床流行病学横断面调查6.1 通过对三种疾病现代文献分析，提取与肝藏血主疏泄相关的症状、证候要素、证候；依据此信息建立临床信息采集量表，通过预调查进行量表的联合信度检测。 6.2 应用临床信息采集表，在全国多中心同步开展大样本约 800例/病的临床流行病学横断面普查。分别对符合现代疾病诊断和各项纳入标准的患者进行临床躯体症状、情绪精神症状的调查，并采用统一的检测标准，检测相关实验室指标。其
21、中主要指标包括：三种疾病同性指标血液流变学指标、血脂、血糖、血清促肾上腺皮质激素释放激素（CRH） ；血清皮质醇，血浆去甲肾上腺素（NE） 、5-羟色胺（5-HT）等；各种疾病特有指标。6.3 建立临床信息数据库，进行多种统计分析，主要包括：频数分析描述调查人群特征；方差分析方法统计不同疾病不同分期的差异性；相关分析方法统计宏观症状与微观指标的相关性；Logist 回归分析、判别分析提取特征症状、指标；并结合无监督数据分析方法（如基于熵的分析、隐结构模型）确立肝藏血主疏泄功能异常的主要宏观表现及微观指标，及其在三种疾病中的共性表现特点和个性特征；建立宏观与微观相结合的肝藏血主疏泄功能异常状态的
22、判别模式。7、应用养血调肝系列方剂对三种疾病患者进行药物干预7.1按照三种疾病现代医学的疾病诊断标准，及较为公认的中医证候诊断标准，选择肠易激综合征肝郁脾虚证 300例、脾胃虚寒证 100例；高血压病肝阳上亢证 300例、肝火炽盛证 100例；肝硬化脾肾阳虚、肝气滞血瘀证 100例、肝肾阴虚、气滞血瘀证 200例。按照临床为理论创新服务，为实验研究奠定基础的原则，按照 1：1：1：1 的比例，分别设立安慰剂对照组、方证对应组、方证次对应组、非干预证候对照组，参照新药创制的研究方法，应用养血调肝方剂的免煎颗粒，进行临床干预研究。 7.2依据建立的肝藏血主疏泄功能异常状态的判别模型编制临床观测量表
23、，对纳入研究的患者分别在治疗前、治疗后及随访期，采集其宏观临床症状、体征及微观指标，建立数据库。 7.3 应用方差分析、秩和检验、判别分析、因子分析、多维尺度分析等多种统计方法，分析各项症状、指标在治疗前后的差异性；不同证候类型间的差异性；不同疾病间的异同性等。并综合分析结果分析从肝论证的干预机制及证治规律。8、肝藏血主疏泄现代科学内涵的实验研究8.1肝藏血主疏泄功能异常的病证结合动物模型的构建8.1.1 建立公认的疾病动物模型。分别采用慢性应激和嗅球切除法制备抑郁症大鼠模型，采用孤养加慢性不可预见性应激和新生鼠母子分离复合避水应激法建立肠易激综合征大鼠模型，采用双肾一夹法和自发高血压大鼠构建
24、高血压大鼠模型，采用腹腔注射二甲基亚硝胺法和皮下注射四氯化碳法诱导肝纤维化大鼠模型。以上的疾病模型分别按照现行的疾病诊断标准进行严格的评价，合格动物纳入研究。8.1.2 进行动态、全面的信息采集。对上述符合疾病诊断的动物模型，从模型成立的时间点起，拟定动物信息观察表，进行规范化的动态信息采集，以评价其证候属性。信息采集表的条目主要来自于：1) 动物实验研究文献提示的反映疾病的动物宏观表征 和反映证候属性的动物宏观表征 ；2) 临床证候研究文献提示的与证候密切相关的理化指标；3) 本项目组的临床研究提示的与具有诊断和鉴别诊断意义的临床症状和可用于证候判别的理化指标特征模式。8.1.3 动物证候属
25、性的辨识。 动物证候属性的辨识以临床诊断标准为依据，采用课题组前期建立的以宏观特征组合、微观指标特征组合、方剂反证相结合的三维动物证候判别方法进行辨识。首先通过宏观特征组合和微观指标特征组合确定各疾病模型的证候演变规律。通过不同疾病造模方法的比较，筛选出较优的抑郁症肝气郁结证、肠易激综合征肝郁脾虚证、高血压肝阳上亢证、肝硬化肝肾阴虚气滞血瘀等病证结合动物模型。8.1.4方剂反证。在上述病证结合动物模型证候属性稳定的时间窗内，分别采用对证的养血调肝方药和次对证的方药进行干预治疗，并以模型组和正常组作为对照，进一步佐证模型动物的证候属性。各模型的干预药物和临床组统一，以相互应证。8.2 肝藏血主疏泄的调控机制研究8.2.1分组。通过上述筛选得到的稳定的反映肝藏血主疏泄异常状态的病证结合动物模型作为实验组，以不符合相应证候诊断的疾病模型和正常组作为对照，从整体、器官、分子三个层面分析肝藏血主疏泄的调控机制，观测指标分
