质粒DNA提取定量酶切与PCR鉴定实验报告 粒 质粒 DNA 的提取、定量、酶切与 PCR 判定 一、 实验目的 1.学习并掌握用碱裂解法提取质粒 DNA 的要领； 2.学习并掌握了解质粒酶切判定的要领； 3.学习并掌握紫外吸收检测 DNA 浓度和纯度的原理和要领； 4.学习并掌握 PCR 基因扩增的实验原理和操纵要领； 5.学习并掌握水平式琼脂糖凝胶电泳的原理和使用要领。 二、 实验原理 1.PCR(多聚酶链式反响) 在 DNA 聚合酶催化下，可以 DNA 为模板，以特定引物为延伸起点，以 dNTP 为原料，通过变性、退火、延伸等步调， 在体外（缓冲液中）复制 DNA，使目的 DNA 按 2 n 方法呈指数形式扩增。 PCR 一次循环的具体反响步调为： A.变性：加热反响系统至 95，使模板 DNA 在高温下完全变性，双链解链 。 B.退火：逐渐低落溶液温度，使合成引物在低温（3570,一般低于模板 Tm 值的 5左右），与模板 DNA 互补退火形成部分双链。 C.延伸：溶液反响温度升至中温 72，
