精选优质文档-倾情为你奉上离子交换分离酵母蔗糖酶一、蔗糖酶的纯化1、酵母细胞破碎称取干酵母粉15g，石英砂约5g，放入研钵中直接研磨约5分钟，取50 ml pH7.3 20mmol/L 的Tris-HCl，分5-6次加入研砵中，边加边研磨，用力研磨20分钟后，将糊状液体转移到2支50ml离心管中，平衡后，于4、12000rpm离心15分钟，收集上清，量体积V1（FI），留1ml上清（FI ）放置20冰箱保存，用于测定蔗糖酶活力、蛋白含量和SDS-PAGE分析。2、热处理将上一步抽提液（FI），迅速放入50水浴中，保温30分钟，其间用玻棒经常搅动，保温结束后迅速用冰浴冷却3分钟，平衡，4，12000rpm离心10分钟，收集上清，量体积V2（F），留1ml上清（F）放置20冰箱保存以备测定。3、有机溶剂（乙醇）沉淀将上清置于一烧杯中，加入等体积20预冷的95%乙醇, 冰浴中进行，慢慢滴加，边加边用玻棒轻轻搅拌均匀，注意控制在8分钟左右加完，再在冰中放置20分钟，然后转移至50ml离心管中，平衡，4，12000rpm离心10分钟
