目的基因的 连接、转化分类及原理 分类： 根据限制性内切酶酶切后产生的末端 的类型，分为非互补突出末端的连接、 相同粘性末端的连接、平末端连接DNA连接示意图载体自连及去磷酸化常用碱性磷酸酶 BAP （大肠 杆菌） CIAP( 小牛肠) 分子量 80,000 温度 60 65 最适PH8.0 热稳 定性好，100 暂 时 性失活，室温放置可 恢复活性，苯酚完全失 活 分子量 100,000 温度 37 最适PH10.0 附近（高底 物浓 度）PH 8.0 附近（低 底物浓 度） 65 30 分钟处 理99 的活性不可逆失活，随 具体条件改变 有变动 ，完全失活苯酚处 理本实验连接材料及连接 体系连接示意图连接体系 载 体DNA 17 ng 目的DNA 50 ng 连 接缓 冲液（5 ） 1.2 ul 用蒸馏 水稀释 至6ul 附注：目的DNA的总体积是3ul，如果不够总质 量以总体积为准1. 载体和插入片段的摩尔浓度比载体：插入片段的摩尔数的变化范围 可为8：1到1：16，但通常的变化范围是3：1到1：3。插入片段的长 度和序列的变化会影响和同一载体的连接效果。每一个连接反应都 需要作
