第五章 目的基因导入受体细胞 外源目的基因与载体在体外连接重 组后形成重组DNA分子，该重组DNA 分子必须导入适宜的受体细胞中方 能使外源目的基因得以大量扩增或 表达。外源DNA 载体DNA 重组分子 原核细胞 真核细胞 扩增或表达 表达 连接 转化或转导 电穿孔或显微注射 受体细胞 基因的重组与转移 DNA体外连接应注意的事项： 1. 插入片段与载体的酶切位点互补 相同的粘性末端才能有效地连接。 尽量避免平端连接。 决不能进行非互补粘性末端连接。 第一节、DNA片段的体外连接EcoRI EcoRI EcoRI （1）用相同的酶切 （2）用同尾酶切 BamHI、BclI、BglII、Sau3A、XhoII 都产生GATC4个碱基的粘性末端。2. DNA插入的方向正确 （1）用双酶切 由于产生的粘性末端不同， 只能以固定方向连接。 EcoRI BamHI EcoRI BamHI EcoRI BamHI 当外源DNA以非定向的方式插入克隆载体时，需 用测序或酶切的方法确定插入方向，上述两种方 法或昂贵或费力。一种快速、简便的PCR法，即 利用载体的通用引物和目的片段的两个特异性引 物直接
