细胞传代培养及细胞计数人癌细胞系传代培养 1. 观察：培养细胞生长活跃，占瓶底80%-90%，无污染 ； 2.弃废液：倒掉瓶中培养液，尽量沥干液体； 3. 漂洗：加1ml 0.25%胰蛋白酶消化液漂洗1次,弃去消 化液； 4. 消化：再加1ml消化液漂洗1次,倒掉大部分消化液, 保留约0.3ml,室温放置35min； 5. 吹打：镜下看到细胞收缩变园, 加12ml含血清培 养液, 用吸管按顺序轻轻吹打，避免出现泡沫； 6. 计数：取样,计数,调整细胞浓度； 7. 接种及培养：按10 4 细胞/ml接种,37、5%CO 2 ，饱 和湿度条件下培养。注意事项 细胞生长至覆盖培养瓶底面积80%左右时, 开始传代。 首次传代培养应适当提高接种细胞浓度。 细胞混杂生长时, 可根据需要选择合适的 方法纯化细胞。 血球计数板法 制备细胞悬液：细胞密度10 4 /ml, 细胞过 多时需适当稀释,单个细胞率95%。 加样：混悬细胞，取少许细胞悬液，从计 数池一侧加入，不要溢出或出现气泡。 计数：10倍物镜下计数四角大方格内的细 胞，压线者只计左边线和上边线。 计算：细胞数/ml=（四大格细胞总数4） 1
