第三章 核酸技术核酸的分离和纯化 核酸电泳 染色体DNA电泳 DNA限制酶切反应和限制酶谱绘制 DNA的连接 PCR技术 分子杂交技术 核酸序列的测定第一节 核酸的分离和纯化一、一般程序 1、供体的核酸分离 供体细胞培养 收集(菌体)细胞 细胞破碎 分离总DNA分离细胞器分离总RNA 分离细胞器DNARNApoly(A)RNA特异性RNA 染色体DNA(组建基因组文库)2、载体DNA分离 载体DNA 感染或转染细胞（病毒型）转化细菌细胞（质粒型） 分离病毒颗粒培养转化细胞、收集菌体 病毒载体DNA分离与纯化破碎细胞 质粒DNA分离与纯化 3、DNA片段的分离 DNA限制酶切凝胶电泳分离特定DNA片段的回收4、质量评估 1）凝胶电泳 2）光密度值测定 3）限制酶切分析 二、细胞裂解 1.酶法： 利用某些细胞壁裂解酶使细胞变为原生质体，然后加去垢剂 使原生质体裂解。 1)细菌：溶菌酶 2)酵母：蜗牛酶、Novozyme234、glusulase、zymolase等 3)丝状真菌：Novozyme234、溶壁酶、纤维素酶 4)植物细胞：纤维素酶、半纤维素酶、果胶酶 酶法裂解时要注意细胞的生长
