精选优质文档-倾情为你奉上FISH一、 当已知某个基因定位在细胞核中，而要知道它具体定位在细胞核的什么位置（或者染色体的具体位置）则需要制备中期相细胞。因为只有中期相的染色体是最利于观察的。具体操作如下：染色体FISH以及免疫荧光I、细胞处理1、 在头一天晚上铺板6cm板（到第二天下午开始做实验，这时的细胞是生长活性比较旺盛的），在实验之前3个小时加秋水仙素（使得终浓度为0.5ug/ml）（短时程高浓度秋水仙素使大量细胞处于中期相）2、 用胰酶消化细胞，然后用6ml 75mM KCl重悬细胞（低渗溶液，使细胞充分吸水膨胀，但是又不会胀破，最好现配现用，用前37预热），37水浴锅 30min。（这一步非常关键，KCl的用量是适细胞量来加的，对于6cm板的细胞一般加6ml，不过一般一个6cm板的细胞就够滴很多个片子了，一般在低渗的过程中是不会有细胞沉淀的，否则就是低渗液太少了，如果低渗液加的太少细胞膜无法打开，则滴片效果大大降低）3、 加入1ml固定液，200g 5min。4、 用5ml固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）重悬细胞（固定），室温30mi
