western-blot-全过程-详细步骤(共2页).doc

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精选优质文档-倾情为你奉上一:提蛋白:1. PBS洗2遍,加RIPA 80-100ul(含10xcooktail)。2. 在冰上刮到离心管中,在冰上裂解20-30min。3. 4度离心,13000rpm、10-15min(准备新的离心管、配BCA 200ul/每孔(A:B=50:1)、96孔板加PBS(2个对照组20ul,实验组18ul))。4. 取上清转移到新离心管中,记住转移的体积。5. 96孔板中每孔加2ul蛋白液。6. 每孔加200ulA/B混合液。7. 37度半小时。8. 测浓度以及标化用一起 在libo文件夹找模板,最后得到每组需要加的RIPA以及loding buffer,还有标化后的浓度。562波长 0.046斜率 (实验组值-对照组值)/斜率=浓度 浓度最好在4-8ug/ul最好,跑胶时就可以只加10ul蛋白液(蛋白含量40-80ug)9. 加好对应的RIPA以及loding buffer后,煮蛋白5-15min,-20度保存。二:跑胶1. 1.0玻板,洗干净2. 配制10%或者12%分离胶 一块胶需要

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