最全的G418筛选稳定表达细胞系总结53页

1、精选优质文档倾情为你奉上 G418筛选稳定表达细胞系经验总结 我做了稳定转染，从G418浓度确定到最后的单化鉴定。
有自己的体会也有其他战友遇到的情况, 和大家分享. 没有总结好的地方，大家补充。
筛选之前确定G418浓度： 1由于每种细胞对。

2、精选优质文档倾情为你奉上 原理 分析转化的功能和表达需要DNA稳定转染至宿主细胞染色体。
外源基因进入细胞后，部分能够通过细胞质进入细胞核内，根据细胞类型，至多80的进入核内的外源DNA得到瞬时表达。
极少数情况下，进入细胞的外源DNA通过系列。

3、 一筛选结果鉴定： 1基因组DNA提取PCR鉴定外源基因 2SHG44重组pcDNA3阳性细胞SHG44vect裂解聚丙烯酰胺凝胶电泳免疫印迹鉴定P16蛋白表达Westernblot。
3测定外源性基因对SHG44细胞增殖的影响 流式细胞仪。

4、 原理 分析转化的功能和表达需要DNA稳定转染至宿主细胞染色体。
外源基因进入细胞后，部分能够通过细胞质进入细胞核内，根据细胞类型，至多80的进入核内的外源DNA得到瞬时表达。
极少数情况下，进入细胞的外源DNA通过系列非同源性分子间重组核连接。

5、 FeynmanR 汇合度confluence也许是我们实验室的翻译，实际上就是指细胞占培养表面的比例，如果细胞铺满了整个容器，我们就认为它们100汇合，也就是汇合度10 最近的一个实验是：3106细胞电转后，我把电激杯中的细胞分别接种。

6、 Protocal 1.G418的配制： 取1g G418溶于1ml 1M的HEPES液中，加蒸馏水至10ml，过滤消毒，4度保存。
2.细胞培养：取待测培养细胞，制备成细胞悬液，按等量接种入多孔培养板中，培养6小时左右开始加药。
3.制备。

7、 Q：G418怎么配制 A：我觉得不能用水配，因为这样PH会变化很大，至少要用PBS。
我是配在HEPES溶液中的，具体方法如下：1g包装的G418瓶子中，加入10ml HEPES溶液，浓度为100 mgml完全溶解后，0.22 um过滤，2。