1、生长抑素受体 1，2 亚型在垂体腺瘤中的表达作者：汪静 王连刚 武胜昔 邓敬兰 【关键词】 受体 关键词: 受体;生长抑素;垂体腺瘤 摘 要:目的 研究生长抑素受体 1，2 亚型在不同病理类型垂体腺瘤中的表达特性. 方法 运用原位杂交技术，以放射性核素标记 SSTR1-2亚型的寡核苷酸为探针，检测 29 例垂体瘤、12 例正常垂体组织中SSTR1，2mRNA 的表达模式. 结果 SSTR1，2 亚型同时表达于功能型、无功能型垂体瘤及正常垂体组织中，它们的阳性率分别为 100%，79%，33%和 100%，86%，25%;其中 SSTR2 表达的强阳性率较高（52%）. 结论 垂体腺瘤可同时表达
2、两种生长抑素受体亚型，因此它具有接受受体介导的生长抑素类似物靶向治疗的乐观前景. Keywords:receptor;somatostatin;pituitary adenoma Abstract:AIM To investigate the characteristics of expres-sion and distribution of2subtypes of somatostatin receptor（SSTR1-2）mRNA in pituitary adenoma.METHODS With -35 SdATP labeled oligonucleotide of the2SSTR
3、subtypes as probe，using in situ hybridization，patterns of mRNA ex-pression were detected in29pituitary tumor cases and12nor-mal pituitary tissues.Additionally，semi-quantitative analysis of the densities of the expression were estimated. RESULTS Two SSTR subtypes were heterogeneously expressed in dif
4、-ferent pituitary adenoma cell types and normal pituitary tis-sues.The positive rate was100%，79%，33%and100%，86%，25%in functioning，nonfunctioning pituitary and nor-mal pituitary tissues，respectively.The densities of SSTR2expression were dominant in29cases than those of SSTR1.There were significant di
5、fferences of positive rate between the pituitary tumors and normal pituitary tissues.CONCLUSION Somatostatin analog-oriented agents have a potential for the treatment of pituitary tumors. 0 引言 生长抑素受体（somatostatin receptor，SSTR）及其亚型在垂体腺瘤组织上的分布与表达，国外起步于 1995 年1，2 ，而国内尚未见相关的报道.我们采用放射性核素标记探针的原位杂交技术，检测 S
6、STR1及 SSTR2 这两种亚型在不同病理类型垂体腺瘤中的表达特性，并与正常垂体组织的表达进行对照，为受体介导的靶向治疗提供实验依据. 1 材料和方法 1.1 材料 垂体腺瘤组织来源于本校西京医院手术切除标本，其中功能型腺瘤 15 例，无功能型腺瘤 14 例.正常垂体组织切片 12 例，由维也那大学的 Vir-golini 教授惠赠.标本经生理盐水清洗，迅速置于液氮中速冻，-80中备用. 1.2 方法 1.2.1 寡核苷酸探针的制备 所用 2 种寡核苷酸分别与 SSTR1，2 亚型 mRNA 的一段相反义，并依次对应于 SSTR1，2 亚型的第252267，237252 氨基酸序列3 :SS
7、TR1:ATG GTG GCC CTC AAG GCC GGC TGG CAG CAG CGC AAG CGC TCG GAG CGC;SSTR2:TCC TCT GGA ATC CGA GTG GGC TCC TCT AAG AGG AAG AAG TCT GAG AAG.探针由北京赛百盛（美国）生物工程公司（CyberSyn，BJ）的 Applied Biosystems381A 型 DNA 合成仪合成. 1.2.2 寡核苷酸探针的标记 采用-35 SdATP（37Bqmol-1 ） ，由中国同位素总公司订购的英国Amersham 公司的产品为标记原料，用 3-末端标记法对上述 2 种探针
8、分别进行标记，反应终止后用核苷酸纯化柱纯化产品4 . 1.2.3 原位杂交程序5 将预先冻存的组织块移入恒冷箱切片机中进行切片（1015m） ，并将所需的切片贴在经明胶处理的载玻片上.取快速干燥的组织切片，置 40gL-1 多聚甲醛固定2030min，用 0.1molL-1 PBS 冲洗及杂交前处理液处理，再经系列乙醇、氯仿脱水、脱脂.杂交时将 200L 杂交液、15L DTT 及标记探针（5.928.88MBq）滴加到切片表面，湿环境中孵育 24h（37）.杂交后，用 1SSC 冲洗切片，然后行脱水干燥.最后将核乳胶涂在切片表面，置暗盒中曝光（4）.46wk 后用 Kodak D19 显影液
9、显影，F-5 坚膜定影液定影，水洗后经硫堇复染、脱水、透明后，用中性树胶封片，在光镜下明、暗视野观察. 1.2.4 竞争性对照试验 随机抽取每例垂体腺瘤的部分切片经常规杂交前处理后，用含过量的未标记探针的杂交液进行预孵育，冲洗后，再用含标记探针的杂交液进行杂交. 1.2.5 半定量分析 从每种肿瘤组织标本中，随机选 4 张切片，进行细胞计数.按杂交信号的有无和阳性细胞的多少分 3 个等级:阴性（-）:切片中无阳性细胞;阳性（+）:切片中阳性细胞占细胞总数的 50%以下;强阳性（）:切片中阳性细胞在 50%以上. 2 结果 2.1 SSTR1，2 亚型探针的放射 放射性核素-35 SdATP 与
10、SSTR1，2 亚型探针的标记完成后，采用 Quick-count2000 小型放射性同位素测量仪（Bios-cun 公司）测得各标记探针的放射性计数，并将其换算成放射性比活度，结果为:SSTR1 标记探针的放射性比活度为99.9GBqmg-1 ，SSTR2 标记探针的放射性比活度为86.7GBqmg-1 ，均达到实验要求. 2.2 SSTR1，2 亚型 mRNA 的分布 2 种受体亚型分子的 mRNA 主要分布于垂体组织中的主质细胞上，且位于其细胞膜表面，细胞核及细胞质内未见阳性颗粒，这说明生长抑素受体属于膜受体的一种.阳性细胞的表面有深色细小颗粒聚集，且颗粒密度大于本底 5 倍以上（Fig
11、1）. 2.3 SSTR1mRNA 的表达及半定量分析 SSTR1mRNA 在功能型、无功能型垂体腺瘤和正常垂体组织中表达的阳性率，分别为 100%，79%和33%（Tab 1）.其中强阳性的例数占总阳性例数的 38%（10/26）. 图 1 略 表 1 SSTR1mRNA 在垂体腺瘤组织中的表达 略 2.4 SSTR2mRNA 的表达 41 例标本中，SSTR2mRNA 表达呈强阳性的例数占总阳性例数的 52%（14/27，Tab2） ，综上结果，虽然不同病理类型的垂体腺瘤组织中均有 SSTR1，2 的共同表达，但两者相比，SSTR2 的表达密度高于 SSTR1 的表达密度，这也表明垂体瘤对
12、 SSTR2 亚型受体特异性的配体的治疗效果会较好.竞争性对照试验:结果在垂体腺瘤组织中未发现阳性的杂交信号，说明本实验所用探针的特异性强，与预封闭的瘤靶组织无非特异性杂交. 表 2 SSTR2mRNA 在垂体腺瘤组织中的表达 略 3 讨论 生长抑素及其类似物通过 SSTR 各个亚型的介导，神经系统内的神经递质或神经调节肽作用，在外周组织直接或间接抑制肿瘤细胞的增殖和分化6-8 .通常认为，生长抑素受体主要分布在 APUD 瘤系统中，但近年的研究表明，SSTR 还存在于乳腺癌、淋巴瘤、小细胞肺癌以及垂体腺瘤等非 APUD 瘤系统的组织当中9，10 .1995 年，SSTR 的 5 种亚型已先后
13、克隆成功，对 5 种亚型结构与功能的研究方兴未艾.学者们认为其中 1，2 亚型的表达与分布在肿瘤的发生和发展中起重要作用11 .生长抑素类似物（somatostatin analogy，SSA）通过 1，2 亚型，尤其是2 亚型的介导发挥着抑制肿瘤细胞增殖和异常分泌的作用12 . 我们的研究表明，无论是功能型，还是无功能型的垂体腺瘤中，SSTR1 及 2 亚型均同时表达，并且这种表达是非均匀性的，其中功能型 2种亚型的阳性率达到 100%，SSTR2 在两种垂体腺瘤中的强阳性率高于SSTR1，它们分别与正常垂体组相差具有统计学的意义.由此可见，SSTR1，2 亚型较为广泛地存在于垂体腺瘤组织中
14、，而且 SSTR2 具有较高的表达强度，这与 SSTR2 可能参与垂体腺瘤的自分泌调控有关13 .令人感兴趣的是，SSTR2 与产生抑制激素异常分泌作用的 Octreotide 有较高的亲和力14 .SSTR2 的分布及其数量与 Octreotide 的疗效间有着良好的相关性15 .本组 SSTR1，SSTR2mRNA 在两种垂体腺瘤组织中的表达阳性率虽有一定的差别，但无统计学意义，可能是因为它们在垂体腺瘤组织中的表达与其组织学类型无关，也可能是研究的病例数较少所致，尚待进一步研究. 参考文献: 1Gregory MM，Joseph MA，Helen AB，Lanrence K，Nichola
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