1、富马酸酮替芬分散片在健康人体的药动学及生物等效性评价作者：陈晓莉，文爱东，赵磊，王萌，吴寅，李宏力 【关键词】 富马酸酮替芬 【Abstract】 AIM: To investigate the pharmacokinetics and bioequivalence of ketotifen fumarate in healthy volunteers. METHODS: A single oral dose of the tested and control ketotifen fumarate was given respectively to 12 healthy volunteers
2、in a randomized twoperiod crossover study. The serum concentration of the two drugs was determined at different time points within 36 hours following the administration by liquid chromatographicmass spectrometric. The main pharmacokinetics parameters were calculated and the bioequivalence was evalua
3、ted by two oneside t test and 90% confidence intervals. RESULTS: The main pharmacokinetics parameters were tmax: （2.71.2） and （3.11.4）h, cmax: （407147）and（389168）ng/L, t1/2:（5.51.6）and（5.72.6）h, and AUC:（29001043）and（2763977）ng/(hL). The relative bioavailability of the tested drug was (11239)%. CONC
4、LUSION: Compared with the control, tested ketotifen fumarate has the advantages of faster absorption and higher bioavailability. The results of statistical analysis indicate that the two drugs are bioequivalent in healthy volunteers (P0.05). 【Keywords】 ketotifen fumarate; chromatography, liquid; spe
5、ctrum analysis, mass; Pharmacokinetics; biological availalility 【摘要】 目的： 研究富马酸酮替芬分散片在健康人体的药代动力学特征及其生物等效性评价. 方法： 12 名健康志愿受试者，采用标准二阶段交叉设计试验方法，分别单剂量 po 富马酸酮替芬分散片（受试品）和富马酸酮替芬片（参比品）2 mg，以液相色谱质谱质谱联用法测定服药后 36 h 内不同时刻的血药浓度，计算主要药动学参数，并采用双单侧t 检验和 90%置信区间进行生物等效性评价. 结果： 受试者分别 po 受试品和参比品后，两者主要药动学参数 tmax, cmax, t
6、1/2 和 AUC（0-36h）分别为：（2.71.2）和（3.11.4） h；（407147）和（389168） ng/L；(5.51.6)和(5.72.6) h；(29001043)和 (2763977) ng/(hL)，受试品的相对生物利用度为(11239)%.结论： 富马酸酮替芬分散片和普通片剂相比，具有吸收快、生物利用度较高的优点；统计学结果表明，两种制剂具有生物等效性（P0.05）. 【关键词】 富马酸酮替芬；色谱法，液相；光谱分析，质理；药代动力学；生物利用度 0 引言 富马酸酮替芬（Kitotifen fumarate, KF）为第 2 代抗变态反应药，临床上主要用于治疗支气管
7、哮喘、过敏性鼻炎和湿疹等变态反应疾病. 因酮替芬的水溶性较差，口服吸收慢，且生物利用度低，为此，我们试制出富马酸酮替芬分散片制剂，它集片剂和液体制剂的优点，服用方便、药物溶出快、体内吸收迅速、生物利用度高，可更好地提高疗效. 为评价富马酸酮替芬分散片在人体内的生物效应，我们采用二阶段自身交叉对照的试验方法，初步研究了富马酸酮替芬分散片在健康志愿者体内的药代学特征及生物等效性，为临床合理用药1-3提供参考依据. 1 材料和方法 1.1 材料 仪器： API4000 型液相色谱质谱质谱联用，配有离子喷雾离子化源以及 LCQ 1.2 数据处理系统（美国 Applied Biosystems 公司）
8、，HP1100 输液泵和 HP100 自动进样器（美国 Agilent 公司） ，色谱柱ZorbaxXBDC18 柱，5 m 粒径，1504.6mm I.D（美国 Agilent 公司）. 药品和试剂： 受试制品为富马酸酮替芬分散片（批号为 20010903, 1 mg/片） ；参比制剂为富马酸酮替芬片（浙江可立思安制药有限公司研制，批号为 20010701, 1 mg/片） ；富马酸酮替芬对照品（中国药品生物制品检定所，含量99.0%） ；内标为盐酸苯海拉明（中国药品生物制品检定所，含量99.4%） ；甲醇和乙腈（色谱纯，美国 Fisher Scientific Ltd） ；其余试剂均为分析
9、纯. 色谱条件： 流动相为乙腈水甲酸（80200.5 v/v/v）,流速为 0.4 mL/min，柱温为室温. 质谱条件： 检测方式为正离子检测；离子源为离子喷雾离子化源，离子喷射电压为 500 V；温度为 500；源内气体 1（GS1，N2） ，流速为 50 a.u；气体 2（GS2，N2） ，压力为 10 Pa；扫描方式采用多重反应监测（MRM）方式，DP 电压微 70 V ；碰撞气（N2 ） ，压力为 5 Pa；定量分析时的碎片离子 M/z 31097(酮替芬)和 M/z 256167(内标物)；碰撞诱导解离（CID）电压为 33 eV(酮替芬)和 25 eV(内标物). 1.2 方法
10、1.2.1 给药方案选择健康男性志愿者 12 名，年龄为（24.13.0）岁，身高(172.73.3) cm，体质量在标准体质量的10%之内，无既往病史，精神状态良好. 不吸烟，不喝酒，试验前 14 d 内未用过任何药物. 本试验采用双周期交叉试验设计，两次试验之间间隔 1 wk. 受试者于每次试验前日晚 20：00 开始禁食，于试验当日晨 8：00 空腹用 240 mL 温开水按规定的剂量及方法给药，服药后 2 h 和 5 h 进统一标准午餐. 服药后受试者在室内休息，采血期间禁烟酒及含咖啡因的饮料. 1.2.2 样品采集于 po 各药前（0 h）和服药后 0.5, 1, 2, 3, 4,
11、5, 6, 8, 12, 24 和 36 h 采集静脉血 5 mL，并立即移入经肝素处理的离心试管中，离心 10 min（3000 r/min） ，将血浆置于无菌干燥塑料管中，于-20保存，在 14 d 内完成酮替芬的血药浓度测定. 1.2.3 样品测定取血浆 0.5 mL，加甲醇水（5050, v/v）混合溶液、内标溶液（100 g/L 盐酸苯海拉明甲醇溶液）和 Na2CO3 溶液（1 mol/L）各 100 L,混匀；加提取试剂乙醚正己烷（1.51, v/v）3.0 mL，涡流 1 min，往复振荡 10 min，离心 5 min（3000 r/min） ，取上层有机相于 40空气流下吹干
12、，残留物于 200 L 流动相中溶解，取 20 L 进行 LC/MS/MS 分析. 1.2.4 标准曲线的制备取空白血浆 0.5 mL，加酮替芬标准系列溶液100 L，配制成相当于浓度为 10, 25, 80, 250, 800, 2000 和 4000 ng/L 的血浆样品，每种浓度做 2 份样品，按“1.2.3”项下操作，记录各色谱峰的峰面积. 以待测物与内标物的峰面积比值（y）对酮替芬的浓度（c）进行回归，在 104000 ng/L 范围内线性良好，得到标准曲线的回归方程为： y=1.32110-4c+7.46610-3 (r=0.9985). 1.2.5 方法的精密度取空白血浆加入适量
13、酮替芬标准溶液，分别配制成 10, 250, 3600 ng/L 的低、中、高 3 个浓度样品，在 1 d 内重复测定3 次，求得日内精密度分别为 8.19%, 4.29%和 5.09%. 将同法配制的 3 个浓度样品在 3 d 内陆续测定 3 次，求得本法的日间精密度分别为 5.23%, 4.07%和 6.91%. 1.2.6 方法回收率取空白血浆 3 份，加入适量酮替芬标准溶液，分别配制成 10, 250, 3600 ng/L 的低、中、高 3 个浓度的样品，按样品测定法各测定含量 6 次，计算方法的回收率，结果分别为： 92.5%, 92.7%和89.8%. 统计学处理： 以梯形法计算
14、AUC（0-36 h）, AUC(0-), tmax, cmax 采用实测值，以消除相血药浓度对数与对应点时间进行回归，计算药物消除半衰期. 将两制剂的 AUC, cmax 经对数转换后进行双单侧 t 检验并计算 90%置信区间以评价生物等效性. 2 结果 2.1 方法的专属性在本试验所采用的色谱质谱条件下，酮替芬和内标的保留时间均为 2.8 min, 酮替芬和内标的峰形良好，无杂质干扰，基线平稳，可确保分析的专一性（Fig 1）. 2.2 药代动力学以梯形法计算 AUC（0-36 h）, AUC(0-), tmax, cmax 采用实测值，以消除相血药浓度对数与对应点时间进行回归，计算药物消
15、除半衰期. 受试制剂与参比制剂的主要药代动力学参数分别为： tmax （2.71.2）和（3.11.4） h；cmax （407147）和（389168） ng/L； t1/2ke (5.51.6)和 (5.72.6) h；AUC（0-36 h）(29001043)和 (2763977) ng/（hL） ；AUC(0-)（31531094）和（3006995）ng/（hL）. 2.3 生物等效性的评价将主要药代动力学参数 AUC（0-36 h）, AUC(0-), cmax 经对数转换后进行双单侧 t 检验（=0.05）并计算受试品与参比品各参数比值的 90%置信区间，结果均拒绝不等效假设（P
16、0.05, Tab 1）. 富马酸酮替芬分散片对富马酸酮替芬片的相对生物利用度为(11239)%，两种制剂在人体内具有生物等效性.表 1po 两种酮替芬制剂后主要药动学参数双单侧 t 检验结果和 90%置信区间（略） 3 讨论 目前国内外关于测定血浆中酮替芬含量的方法有紫外分光光度法和反相高效液相4，5色谱法. 因富马酸酮替芬制剂中酮替芬的含量较低，po 2 mg 富马酸酮替芬后血浆中酮替芬的浓度仅为 ng/L 级，而上述测定方法检测极微量物质的灵敏度较低，其具有良好线性关系的检测范围分别为 210 mg/L 和 0.080.88 mg/L，本研究我们采用的液相色谱质谱联用法检测的线性范围可达
17、到 104000 ng/L，其高度的检测灵敏性可确保测定血浆中的极微量酮替芬浓度的准确性和可靠性. 在流动相的选择上，选用乙腈水甲酸，甲酸为有机酸，可增加酮替芬的溶解，弥补了文献5中采用盐酸的不足，同时减少了对色谱柱的损耗. 本研究以梯形法计算 AUC（0-36 h） ， tmax, cmax 采用实测值，通过对主要药动学参数进行方差分析、双单侧 t 检验，结果表明，12 名受试者服用受试制剂和参比制剂后，两组之间各药动学参数无显著性差异，说明两种制剂在 12 名受试者体内的处置情况较为相似. 富马酸酮替芬分散片 AUC（0-36 h）, cmax 略高，tmax 略低，其相对于富马酸酮替芬片
18、的相对生物利用度为（11239）%，表明两种制剂在人体内具有生物等效性. 【参考文献】 1 李宏力，樊代明，李哲，等. 甲磺酸加替沙星胶囊替人体药代动力学及生物等效性评价J. 第四军医大学学报，2003; 24（20）:1915-1918. Li HL, Fan DM, Li Z, et al. Assessment on pharmacokinetics and bioavailability of gatifloxacin mesylate capsules in healthy volunteers J. J Fourth Mil Med Univ, 2003; 24（20）:1915-
19、1918. 2 王萌，文爱东，赵磊，等. 盐酸曲马多片人体药代动力学和生物等效性J. 第四军医大学学报，2003; 24（20）：1902-1904. Wang M, Wen AD, Zhao L, et al. Pharmacokinetics and relative bioequivalence of tramadol hydrochloride in healthy volunteers J. J Fourth Mil Med Univ, 2003; 24（20）：1902-1904. 3 文爱东，赵磊，张三奇，等. 阿莫西林克拉维酸钾在健康志愿者体内的相对生物等效性J. 第四军医大学
20、学报，2001; 22（19）：1805-1808. Wen AD, Zhao L, Zhang SQ, et al. Relative bioequivalence and pharmacokinetics of amoxicillinclavulanic acid in healthy volunteers J. J Fourth Mil Med Univ, 2001; 22（19）：1805-1808. 4 Gran SM, Goa KL, Fitton A. Ketotifen, a review of its pharmacodynamic and pharmacokinetics properties, and therapeutic use in asthma and allergic disorders J. Drugs, 1990; 40(3):412-448. 5 Grannen A, Lonnebo A, Beck O. Pharmacokinetics of Ketotifen after oral administration to healthy male subjects J. Biopharm Drug Dispos, 2002;13(4):255-262.
