1、喉癌组织中基质金属蛋白酶 MMP2 及其抑制剂 TIMP2 的表达【关键词】 喉肿瘤 关键词: 喉肿瘤;基质金属蛋白酶;免疫组化;淋巴转移 摘 要:目的 研究 MMP-2 及 TIMP-2 在喉癌组织中表达的情况及其临床相关性. 方法 用免疫组化 LSAB 法检测 64 例石蜡包埋的喉鳞癌组织与 5 例正常喉粘膜组织石蜡标本中 MMP-2 和 TIMP-2 的表达. 结果 在淋巴结转移组与非淋巴结转移组 MMP-2 的阳性表达率分别为 74%和39%，TIMP-2 的阳性表达分别为 52%和 24%，经统计学分析二者的 2 值分别是 7.1800（P0.05） ，5.0420（P0.05） ，
2、表明明显相关.而MMP-2 与 TIMP-2 的阳性表达率与喉癌的部位、分化程度、临床分级、病理分级均无明显相关. 结论 检测 MMP-2 和 TIMP-2 的表达对喉鳞癌的诊断和预后有一定的参考价值. Keywords:laryngeal neoplasms;matrix metalloproteinase;immunohistochemical;lymphatic metastasis Abstract:AIM To study the expressions of matrix metallo-proteinase-2and tissue inhibitor of metalloprot
3、einase-2in hu-man laryngeal squamous cancer and the relationship between the expressions and clinical features.METHODS MMP-2and TIMP-2were examined with immunohistochemical SAB method in the paraffinembedded specimens from64cases with laryngeal squamous cell carcinoma（LSCC ）and5normals who served as
4、 the contol.RESULTS In the group of cervical lymphnode involvement and non-cervical lymphn-ode involvement，their positive rates of MMP-2were74%and39%，and their positive rates of TIMP-2were52%and24%， （MMP-2s2 =7.1800，P0.05;TIMP-2s2 =5.0420，P0.05） ，which showed a significant correlation between them.M
5、MP-2and TIMP-2had no relationship with the situation and malignant degree.Both MMP-2and TIMP-2were expressed more strongly in carcinoma with cervical lymphnode involvement group than in non-cervical lymphn-ode involvement group，but the high TIMP-2expression could not control the activity of MMP-2.No
6、nbalance be-tween MMP-2and TIMP-2bore no relationship to human la-ryngeal squamous cell carcinoma invasion and metastasis.CONCLUSION The detection of MMP-2and TIMP-2ex-pressions may contribute to diagnosis and prognosis of LSCC. 0 引言 基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）通过对细胞外基质（extracell matrix，E
7、CM）的降解而促进癌细胞对周围组织的浸润;其抑制剂，基质金属蛋白酶组织抑制因子（tissue inhibitor of metalloteinases，TIMPs）则通过下调金属蛋白酶的活性而抑制肿瘤细胞的侵袭和转移1，2 .MMPs 及 TIMPs 在喉鳞癌中表达的研究报道甚少.为了探讨 MMPS 及 TIMPS 在喉癌组织中的作用，我们采用免疫组化的方法，检测 64 例喉鳞状细胞癌组织中 MMP-2 及 TIMP-2 的表达情况，分析喉癌在不同的生长部位、不同的临床分期、不同病理分级、是否有淋巴结转移等各种情况下二者的阳性表达率，再经过统计学处理后探讨其临床相关性. 1 材料和方法 1.1
8、 材料 山西医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科 1997/1999 年活检或手术切除的经病理证实为鳞状细胞癌 64（男 53，女 11）例，年龄4175 岁，术前未作过放疗和化疗.声门上型 14 例，声门型 29 例，混合型 21 例.按细胞分化程度分为:I 级 18 例，II 级 33 例，III 级 13 例.经临床及颈清扫术证实有淋巴结转移的 23 例，无淋巴结转移的 41 例.按1987 年颁布的分级标准，T1 T2 级 43 例，T3 T4 期级 21 例.5 例正常喉粘膜取自尸检患者，所有标本均经 40gL-1 甲醛固定，石蜡包埋.所用试剂均由福州迈新公司提供，喉癌组织为石蜡包埋的存档
9、蜡块. 1.2 方法 连续 4m 切片，正常喉粘膜标本经石蜡包埋，再作连续4m 切片.石蜡切片脱蜡至水.在 30mLL-1 H2 O2 中浸泡10min，以阻断内源性过氧化物酶活性.PBS 洗 5min3.抗原修复:检测MMP-2 用 40gL-1 胃蛋白酶消化，37条件 40min;检测 TMP-2 为枸橼酸盐热修复 10min，9098条件.PBS 冲洗5min3.100mLL-1 的正常山羊血清封闭，37孵育 10min，倾去血清，滴加 1100 的 MMP-2mAb 或 1100 的 TIMP-2mAb，4过夜，PBS 冲洗 5min3，滴加 1100 的抗体 37，孵育 30min，
10、PBS 冲洗5min3，滴加 1:100 的辣根酶标记链霉素卵白素，37孵育 30min，PBS冲洗 5min3，DAB 染色 20min，苏木素复染.封片.免疫组化阳性信号显示为棕黄色颗粒，选取 5 个有代表性不重叠的高倍视野，计算棕黄色颗粒所占的面积百分比，平均面积百分比10%为阴性，10%为阳性. 统计学处理:采用 2 检验3 . 2 结果 正常喉粘膜组织中末见有 MMP-2 及 TIMP-2 表达.在喉癌组织中，MMP-2 主要表达于癌巢周边的细胞，癌巢周边的基质，癌周浸润的单核细胞，基质细胞，血管内皮细胞，TIMP-2 主要表达于癌巢周边基质及个别癌细胞（Fig1）. 图 1 略 表
11、 1 喉癌组织中 MMP-2 和 TIMP-2 的阳性表达 略 3 讨论 基质金属蛋白酶（MMPs）活性异常有利于肿瘤的浸润和转移4 .恶性肿瘤通过附着、基质溶解及移动 3 个连续重复的过程使基质受到侵袭、破坏.基底膜是由 IV 型胶原、糖蛋白、蛋白多糖等组成的厚实的网状结构，IV 型胶原是其主要支架.MMP-2 是 MMPs 中的一种即明胶酶 A，它可降解基底膜中的 IV 型胶原，从而破坏基底膜，有利于肿瘤的浸润与转移.而基质金属蛋白酶组织抑制因子（TIMPs）则能与活化 MMPs 的结合抑制其活性，还能以共价健的形式与明胶酶原结合，从而抑制明胶酶的活性及其活化，TIMPs 中的 TIMP-
12、1 和 TIMP-2 都能与 MMP-2 呈 11 结合，且 TIMP-2 对 MMP-2 的抑制作用较 TIMP-1 强 710 倍以上，TIMP-2 通过抑制 MMP-2 的活性抑制 ECM 的降解，从而抑制肿瘤的局部生长、浸润和转移，阻止继发灶的形成和限制肿瘤血管的形成，因此，肿瘤的浸润和转移与 TIMP-2 及 MMP-2 均有关. MMP-2 阳性表达说明癌组织对基底膜产生了降解、破坏并有新生血管的形成，肿瘤的持续生长、浸润和转移依赖于新生血管的形成5 ，血管的形成是肿瘤迅速生长和转移的必要条件，其形成可促进肿瘤病灶的三维扩散6 .在相应部位 TIMP-2 表达率也增高，这是由于局部
13、在受到肿瘤的刺激后可以产生更多的 TIMP-2.在淋巴结转移组 MMP-2，TIMP-2 阳性表达率均高于无淋巴结转移组.MMP-2 的阳性表达率分别为 74%（17/23） ，39%（16/41）.TIMP-2 的阳性表达率分别为52%（12/23） ，24%（10/41） ，并有显著的病理学统计意义（P0.05）.二者阳性表达率增高与喉癌淋巴转移有关.这是由于 TIMP-2 增高的程度不足以抑制 MMP-2 的活性.MMP-2-TIMP-2 失衡导致了基底膜的降解和肿瘤血管的形成，进而促进肿瘤的浸润和转移.由此可见 MMP-2 和 TIMP-2 是反映肿瘤浸润和转移的指标. 参考文献: 1
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