1、生物医学光子学复习题以下答案为本人根据上课 PPT 与自己理解所写，无法保证答案的完全正确，如果发现错误希望可以修改后上传，方便大家1. Biophotona) 生物体的超弱发光有哪些基本特性？它与哪些生命活动相关？为什么利用生物体的超弱发光能够用于疾病的诊断？答：生物体超弱发光基本特性（1）普遍性，即所有生物组织样品中都有。 （2）发光强度弱，每秒的强度为 1e-7W。 （3）谱特征，连续分布无特征峰。 （4）高敏感，对生物组织内部和外部。 （5）来源于生物分子的能级跃迁。相关的生命活动：细胞分裂，细胞死亡，光合作用，氧化作用，解毒过程，肿瘤发生因为其反映了细胞内与细胞间的信息传递，功能调节
2、等重要的生命活动，因此可以b) 为何生物的超弱发光? 它与哪些生命活动相关？答：生物分子在代谢等相关生命活动中产生能级跃迁，退激发光。c) 为何“代谢发光”或者“相干机制”答：代谢发光机制：由于呼吸链上固有的“能力学缺陷”而引起了偶发的电子泄露，产生了氧化自由基，然后在反应中的激发态分子退激发光。主要与生物的有氧呼吸有关。相干机制：产生于一个高度相干的电磁场，从而诱发或自发发光。DNA被认为是生物体内一个主要的相干源，主要与生物的细胞分裂有关。d) 针对超微弱发光的检测，有哪些测量技术，分别说明其测量原理。答：单光子计数技术，主要通过光电倍增管来检测生物发光强度时域的信号。二维或三维单光子成像
3、检测技术，主要有微通道板像增强器为主的图像探测系统。具有二维光子检测能力，可同时获得时域和空间的信息。光谱分辨和时间分辨的功能检测系统。e) 超弱发光有哪些应用？超弱发光的医学应用 反映体内生理状态 荷瘤前后（病变正常） 心博停止前和心博停止后 疾病诊断及愈合评价 血液的超弱发光 尿液 在法医上的应用用于死亡时间的推测 临床死亡（心跳停止）后 生物学死亡（细胞性死亡） 推断损伤时间、形状、程度及伤口愈合时间 损伤与恢复程度与超弱发光有依赖性生物超弱发光在农业上的应用 选择最佳施用农药的剂量和时间 主要应用于选种 品质评价 种子分类 抗性研究生物超弱发光在环境监测的应用 废水、废液、工业污水中重
4、金属及致病菌的检测：生物超弱发光要比传统的化学分析方法灵敏度高得多。 环境毒物的测定：用生物发光检验SO2对植物毒害的程度。 元素的测定：生物的超弱发光对许多金属离子很敏感，可定量测定钙、铜、锌、锰、铁等元素的浓度。生物超弱发光在食品检验中应用 食品来源 食品的新鲜度 食品的质量生物超弱发光在药理学方面的应用 药物的抗氧化作用能力和方式的研究 检测病人对药物的过敏反应 评价药物对病人的治疗作用2. Fluorescencea) 利用分子能级图解释分子光谱涉及的各种能量跃迁过程。b) 荧光是如何产生的？有什么特点？c) 分子结构与荧光的关系。答：分子结构中的振动能级决定荧光的发射谱宽度。d) 理
5、解与掌握荧光光谱中的一些重要概念（包括：Beer-Lambert 定律、吸光度与透过率的换算、摩尔吸收系数与浓度之间的关系、斯托克斯位移、荧光量子产率的定义、荧光亮度、光稳定性、荧光寿命）斯托克斯位移：生物组织的吸收峰与荧光的发射峰之间的波长移动。光稳定性：指荧光强度随着时间的改变，如果荧光强度随时间不改变则稳定性强，反之不强。荧光寿命：在激发光撤去后，荧光强度衰减为由来的 1/e 所需时间为荧光寿命。e) 荧光检测包括哪些参数？（发射谱、激发谱、stokes 位移、量子产率、荧光寿命）f) 生物体中主要的内源荧光色团有哪些？通过对它们的监测可获得哪些生物学信息 答：胶原蛋白和弹性蛋白；细胞内
6、代谢路径：NAD 、 NADH。组织结构信息和代谢活性g) 向生物体内引入外源荧光可发挥什么作用？监测细胞功能与化学分布，RNA or DNA 序列，以及肿瘤标记h) 选择荧光探针的依据是什么？（激发波长、发射波长、光稳定性、漂白性、荧光的定性或定量、荧光探针的特异性和毒性、pH 适宜值）i) 荧光探针导入：（酯化法；形成乙酰羟甲基酯（AM） ；细胞膜通透性增强法；使用透膜剂使膜通透性增强；微注射法； 将染料通过显微注射法直接注入细胞内）j) 按照制备方法分，荧光探针有哪些种类？答：化学荧光探针:化学方法合成的基因荧光探针:可遗传、由 DNA 编码、蛋白质组成的 k) 选择探针时需要主要考虑哪
7、些因素？（见 h）l) 在蛋白质分子中，能发射荧光的氨基酸有哪些？它们的吸收和发射波长在哪里？答：色氨酸 Trp 和酪氨酸 Tyr 有二个激发光谱峰,一个发射光谱峰,即220nm,287nm/348nm;225nm,280nm/303nm，苯丙氨酸也可以激发荧光但较弱一般不计。m) 绿色荧光蛋白有哪些生物化学特征和光谱特征？野生型和增强型的绿色荧光蛋白有什么异同？n) 绿色荧光蛋白突变体有哪些性能特点？答：突变提高了 GFP 的光谱性质，荧光强度和和光稳定性也大大增强，突变后的激发峰 488nm，发射峰是 509nm，这与 FITC 滤光片一致，提高了其潜在的使用价值。o) 荧光蛋白作为标记物
8、或指示剂的优势有哪些？答：1 低浓度对样品干扰小2 3D 测量3 非常适合溶液和细胞4 非常灵敏，实现单分子检测p) 产生 FRET 的条件有哪些？答：FRET 是指能量给体（ Donor）与受体（Acceptor）间通过偶极-偶极耦合作用以非辐射方式传递能量的过程 即能量给体被激发后，从基态跃迁到激发态，由于偶极 -偶极相互作用，供体分子激发态能量 h 以非辐射方式传至受体分子，而后受体分子通过发射光子弛豫，释放能量。条件是：1.一种荧光蛋白的发射光的波长与另一种荧光蛋白的吸收光的相同。2.工体和受体之间产生耦合。q) 什么是 Forster 距离？常用 FRET 对的 Forster 距离
9、大概在什么范围？答： Forster 能量转移 ：一对合适的荧光物质可以构成一个能量供体 (donor) 和能量受体 (acceptor) 对 , 它们之间由于偶极的相互作用 , 激发供体分子的光子能量 h 可能被传递至受体分子 , 而后受体分子通过发射出光子 h (h h ) 而松弛 , 这就是 1948 年由 Forster 首先提出的荧光共振能量转移理论（ 1）大概距离为 1-10nmr) 荧光蛋白作为分子探针在生物标记中的应用方式答：生物融合：细胞活性探针，细胞膜探针，细胞器探针，指示剂：有些探针对 Ph 敏感，可以检测生物组织 Ph,3. Optical propertiesa) 常
10、用的组织光学特性参数有哪些？如何描述其基本概念答：吸收系数 Ua:光在极短的距离内被吸收的概率散射系数 Us:光在极短的距离内被散射的概率各向异性因子 g，表示散射的各项异性的参数。g=0 表示各向同性b) 掌握几个派生的组织光学特性参数及表达式：约化散射系数、总的衰减系数、有效衰减系数、扩散射系数、穿透深度、有效穿透深度答：约化散射系数 s (mm-1)在远离边界与光源的表况下常用一个参数来描述光子的散射特性_约化散射系数 s=(1 g) s 衰减系数与穿透深度总的衰减系数与总的穿透深度约化衰减系数与约化穿透深度有效衰减系数与有效穿透深度以上参数具体的用途还需要结合相关的计算方法才可以理解。
11、c) 生物组织中吸收、散射的物理机制与生理机制是什么？光学特性与生物组织生理特性是如何关联？i. 吸收的成因：吸收源于分子色团的能级跃迁，即电子或振动能级跃迁ii. 散射的成因：散射则主要源于混浊生物组织中的折射率不匹配、它与生物体的超微结构相关d) 瑞利散射与米氏散射限是基于什么来划分的（散射子与光波长的关系）e) 利用米氏理论说明影响生物组织散射的因素有哪些？散射的大小与这些量之间有怎样的依赖关系？米氏散射的散射光强 Is,波长 ，r 为颗粒半径。4. light transport theorya) 生物组织中的光子输运理论（或称辐射传输理论）的基本思想是什么？答：基本思想：将入射激光看
12、成是离散的光子流，生物组织看成是吸收颗粒与散射颗粒的混合，当光子撞击到吸收颗粒时，该光子寿命结束，如果撞击到散射颗粒，则光子根据各向异性因子 g,改变一定传播方向继续前行。在此过程中不考虑光的干涉和衍射且认为散射是没有能量损失的。b) 简述辐射传输方程的物理意义5.6. different modelsa) 辐射传输方程的求解方法有哪些？一级近似与扩散近似的适用范围各有什么不同？b) MonteCarlo 方法的基本思想。答：光在生物组织中的传播可视为光子与介质中微小粒子的一系列的散射与吸收事件。由光源发出的光在其运动方向上如果碰到散射粒子，光子改变方向继续传播,如果碰到吸收粒子，光子则为粒子
13、所吸收光与微小粒子的相互作用过程构成马尔可夫过程。对以上过程的程序描述即构成了c) 请用 MC 模拟光在组织中的分布，当组织的吸收、散射发生变化时，这种分布会如何变化？答:随着 Us 和 Ua 的增大，光子沿纵向和横向的分布同时减小，因为更大的 Ua 组织吸光能力更强，更大的 Us 则有更大的散射概率而使能量减小。而当 g 增大时，光子沿纵向与横向的分布同时减小，因为 g 的增大使光在组织中的传播更具前向性，因此更少的光子溢出表面。7. Detectors and collectionsa) 探测器的种类有哪些？光电（光电倍增管） 、半电体（CCD） 、热（热敏电阻） 、b) 光接收器的种类有
14、哪些？相机、光纤、各向同性接收器，积分球c) PMT 有哪些主要组成部分？使用 PMT 时要注意什么事项？答 ： 组 成 ： 光 电 阴 极 、 电 子 光 学 输 入 系 统 、 电 子 倍 增 系 统 、 阳 极注 意 事 项 ： 严 格 控 制 环 境 温 度 ， 减 少 热 电 子 发 射 ， 降 低 热 电 流 ， 提 高 灵 敏 度 。 避消失，散射和吸收的能量辐射的能量，这贡献是由于“非交互式 ”，即使非散射介质也会产生从方向 s散射到当前体积元来的能量，在该体积元内发光源产生的的能量免 磁 场 影 响 。d) CCD 的工作原理？CCD 的信噪比与什么参数有关？答：以 电 荷
15、作 为 信 号 ， 存储由光或电激励产生的信号电荷，当对它施加特定时序的脉冲时，其存储的信号电荷便能在 CCD 内作定向传输，实现电荷的存储和电荷的转移CCD 的信噪比与感光器件的面积有光e) 如何选择合适的光探测器与光接收器？答：不同探测器可将光信号转化为所需要的信号，如：光电导（光敏）-探测近红外、中红外和远红外波段；光电管与光电倍增管适用于灵敏度要求高，稳定性好，响应速度快和噪声小，电流放大电路；热探测器对光辐射的波长无选择性。综上知，依据动态特性、灵敏度、波段要求选择合适探测器。接收器选择依据要获得的信号，如相机成像，光纤传输，各向同性接收功率信息。f) 为什么针对温浊样品的测量常用积
16、分球？答：积分球可通过测量生物组织的漫反射率与漫透射率很好得到浑浊样品的散射系数，吸收系数。8. Reflectance or transmission methodsa) 组织光学参数测量技术的各种分类方法有哪些？其不同分类的依据是什么？b) 准直透射测量方法能够得到哪些参数？对被测样品有何要求答：吸收系数 a、散射系数 s 对被测样品有何要求样品厚度小于 10m；维持样品的光学平滑度 c) 积分球内投置挡板起何作用？答：防止由样品表面反射和准直透射的光直接进入检测器。d) 基于空间分布的漫反射测量法能获得哪些参数？答：反射率、吸收系数。e) 为什么基于漫射光谱测量能获得组织（皮肤）的光学特
17、性参数，并能用于皮肤疾病的诊断？答：漫射光谱，数据处理后可以得到皮肤部位的吸收光谱，从而用于疾病诊断。9. Integrating sphere techniquea) 试说明利用双或单积分球实现对混浊样品测量时，两者在功能上各位何优势？答：1.单积分球：测量的不同时性由于不能实现漫反射、漫透射和准直投射的同时测量，由此可能产生由于光源功率和检测系统的不稳定性、样品随时间推移产生的形变和失水等问题带来的误差；其次是机械切换误差，因为在漫反射率、漫透射率和准直透射的测量过程需要改变光源的入射方式或者检测器的接受位置，由此带来的系统切割误差是不可忽略的。2.双积分球：实现准直透射、漫透射、漫反射的
18、同时测量，从而克服单积分球系统带来的非同时性和机械切换误差。缺点：反射求和积分球之间“串音” ，使漫反射和漫透射率较实际偏高。10. IADa) 利用积分球测量样品的漫反射与漫透射是一种常用的方法，应如何综合考虑来设计积分球的尺寸、以及样品口径等？答：IAD 算法的基本思想：其基本思想在于把样品(无限大的平板模型)分成厚度相等的两份, 通过计算其中一份的漫反射和透射率来计算原样品的漫反射和漫透射。我感觉具体看一下测试的整个过程已经可以了，具体过程大家可以参考积分球的生物医学光子学实验适用性：b) 基于积分球的反射与透射测量，利用 IAD 算法计算组织光学参数时主要会引入怎样的误差？答：样品侧漏
19、被误认为吸收引起散射系数和吸收系数的误差。11. Microimaginga) 为什么荧光显微镜最受人重视？典型的荧光显微镜包括哪些主要部件？答：荧光显微镜不仅可以组织成像而其可以功能成像组成：激光光源，滤板系统，普通光学显微系统b) 滤光片有哪些类型和性能指标？答：激发滤光片与发射滤光片。性能指标：单色性，滤光带宽c) 物镜的数值孔径与显微镜分辨率、图像亮度之间的关系？答：数值孔径越大，物镜的放大倍数越大，分辨率也就越大，图像亮度越小。d) 显微镜的放大倍数如何计算？答：目镜放大倍数乘以物镜放大倍数e) 根据普通的宽场显微镜与共聚焦显激光扫描显微镜的组成原理出发，比较两者的区别，并说明其在应
20、用中的优缺点f) 试从共聚焦显激光扫描显微镜与双光子激发荧光显微镜的组成原理出发，比较两者的区别，并说明其在应用中的优缺点共聚焦显激光扫描显微镜 双光子激发荧光显微镜原理 由激光器发射的一定波长的激发光（点光源） ，由物镜聚焦于样品的焦平面上，样品上相应的被照射点受激发而发射出的荧光，通过针孔后，到达检测器并成像。这样由焦平面上样品的每一个点的荧光图像组成了一幅完整的共聚焦图像。在高光子密度的情况下，荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子，在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后，发射出一个波长较短的光子；其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。原理图优点 共聚焦12.
21、少背景噪音13. 高灵敏度14. 更好的成像对比扫描3D X 断层摄影激光1. 更小的色彩偏差2. 更高的分辨率激发源不会被焦平面上方吸收更长的激发波长致使更少的散射焦平面外的荧光分子不被激发使较多的激发光可以到达焦平面，使激发光可以穿透更深的标本激发光谱带与荧光发射带没有重叠没有来自拉曼扫描的噪音长波长的近红外光比短波长的光对细胞毒性小缺点 荧光可能被吸收或散射，成像深度被限制光损伤严重，观察较短针孔阻挡部分来自焦平面的扫描荧光，一些图像丢失只限于荧光成像热损失会发生如果样品中含有吸收激发波长的发色团，例如色素比起扫描成像有轻度的低分辨率，这种现象可以被设置检测孔光栏减弱，但是又会造成丢失图
22、像的代价比较贵a) 多光子吸收有什么特点？ 为什么双光子激发荧光显微镜需要飞秒激光作为激发光源？答：多光子共同激发荧光过程，对于吸收光子的频率要求降低产生的荧光强度与激发光的强度的光子数次方成正比多光子激发需要更大的光强具有空间局域特点，只有焦点处的微小局域内才能吸收双光子激发荧光双光子激发需要很高的光子密度，为了不损伤细胞，双光子显微镜使用高能量锁模脉冲激光器。这种激光器发出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量，其脉冲宽度只有 100 飞秒，而其周期可以达到 80 至 100 兆赫。b) 为什么利用共焦针孔可以提高显微成像的横向与纵向分辨率？答：共焦针孔的存在使得除了焦平面上射出的荧光以
23、外都不能进入到物镜当中，从而大幅度减小了背景噪音，造成了很强的对比度。因此产生了高分辨率。 （影响显微镜分辨率的有入射光波长，物镜的数值孔径，明暗对比度）c) 多光子与共聚焦荧光显微镜有什么异同点？多光子激发荧光显微镜 共聚焦扫描显微镜点激发 容积激发没有共焦孔 有共焦孔更少的光漂白和损失 更多的。 。 。荧光强度 I 正比于 I0 的 N 次方 荧光强度 I 正比于 I0d) 多光子荧光显微镜在生物成像中的优势与不足有哪些？e) 荧光成像技术有什么优缺点？为什么需要发展近红外荧光探针？答：f) 试写出 CFM、2PM 、OCT 的中英文全称答：CFMConfocal Microscopy 共
24、聚焦扫描显微2PMTwo -photon microscopy 双光子显微OCTOptical Coherence Tomography 光学相干层析技术15. Coherence-domain imaging a) 试写出 CFM、2PM、OCT 、LSCI 与 DOT 的中英文全称，并说明其应用领域各有哪些不同答：OCTOptical Coherence Tomography 光学相干层析技术它利用弱相干光干涉仪的基本原理，检测生物组织不同深度层面对入射弱相干光的背向 反射或几次散射信号，通过扫描，可得到生物组织二维或三维结构图像。在眼内疾病尤其是视网膜疾病的诊断，随访观察及治疗效果评价等方面具有良好的应用 前景。LSCILaser speckle contrast imaging 激光散斑成像技术目前这种激光散斑成像技术已被用于监测皮肤、视网膜眼底的血流变化。DOTdiffuse optical tomography 扩散层系成像利用扩散光在组织中的相对穿透深度实现器官级（510cm）的临床诊断用层析成像，
