1、蛋白质的结构与功能Structure and Function of Protein,第二章,朱利娜 南方医科大学基因工程研究所生物化学与分子生物学教研室,内容提纲,蛋白质的分子组成蛋白质的分子结构蛋白质结构与功能的关系蛋白质的理化性质蛋白质的分离和纯化蛋白质的序列分析与结构分析,蛋白质结构与功能的关系The Relation of Structure and Function of Protein,第三节,一、蛋白质一级结构与其高级结构和功能的关系,（一）一级结构是空间构象的基础 特定的空间构象主要是由蛋白质分子中主链和侧链R基团形成的次级键来维持； 蛋白质的一级结构主要决定了它的空间结构。
2、,举例：牛核糖核酸酶变性和复性实验,Cys26,Cys84,Cys72,Cys65,Cys58,Cys110,Cys40,Cys95,天然状态，有催化活性,尿素、 -巯基乙醇,去除尿素、-巯基乙醇,非折叠状态，无活性,The Nobel Prize in Chemistry 1972,Christian B. Anfinsen,Stanford Moore,William H. Stein,一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础，但不是决定蛋白质空间构象的唯一因素。,分子伴侣,1）破坏非共价键（特别是氢键）的试剂：尿素，盐酸胍。2）破坏（还原）二硫键的试剂：-巯基乙醇，巯基乙酸、过甲酸
3、、二硫苏糖醇，二硫赤藓糖醇。,破坏蛋白质高级结构的试剂,（二）一级结构是功能基础,2.一级结构相似，其功能也相似,一级结构不同，生物学功能各异,如：血红蛋白与胰岛素,3.一级结构中非“关键”部分改变，功能不变,如：胰岛素,如：镰刀形红细胞贫血,4.一级结构中“关键”部分改变，生物活性也改变，引起疾病,如：细胞色素C,哺乳动物胰岛素氨基酸序列差异,由同一基因进化而来，具有相似结构相似功能的一类蛋白质，称为同源蛋白质。,组成：一条肽链（含104个氨基酸残基）+铁卟啉作用：传递电子，即Fe3+ + e- Fe2+目前已测定了近百种生物的细胞色素C的氨基酸顺序，发现由于种属遗传差异，其一级结构有较大的
4、不同。 但有35个不变aa残基，对维持细胞色素C的分子构象和传递电子的功能是必需的。,细胞色素C,研究氨基酸序列可以阐明生命进化史，氨基酸序列的相似性越大，物种之间的进化关系越近。,镰刀形红细胞贫血（Sickle-cell of anemia ）,正常细胞,镰刀形细胞,镰刀状贫血 血液中大量出现镰刀红细胞，其携带氧的功能只有正常红细胞的一半，患者常因此缺氧窒息。,镰刀形贫血,这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为“分子病”。,谷AA（极性） 缬AA（非极性）,*由于缬氨酸上的非极性基团与相邻非极性基团间在疏水力作用下相互靠拢，并引发所在链扭曲为束状，与氧结合功能丧失， 并导致红细胞变形为镰
5、刀状而极易破碎，产生贫血，严重时可使病人窒息甚至死亡。,总之 蛋白质的一级结构是其高级结构与生物学功能的基础。,二、蛋白质空间结构与功能的关系,举例：核糖核酸酶变性复性实验1. 构象在，功能在举例：血红蛋白的变构效应2.构象改变，功能变化举例：疯牛病,（一）肌红蛋白与血红蛋白的结构与功能,肌红蛋白(Myoglobin，Mb),血红蛋白(Hemoglobin，Hb),1. Hb与Mb的比较,Hb与Mb 的相似点： 1. Hb的两个亚基和两个亚基的结构与Mb十分相似：都占有70以上的-螺旋，肽链的转折角与走向相近似； 2. 均为球状蛋白质，含铁卟啉； 3. 都有储氧和供氧功能,氨基酸序列大不相同，
6、但空间结构相似，因而功能相似（载氧）空间结构决定功能,肌红蛋白 血红蛋白 血红蛋白,血红素结构,Fe 离子六个配位键： 4个与吡咯环上的N相连； 1个与F螺旋段His的咪唑基相连； 1个与O2结合,Hb与Mb的不同点： 1. aa残基数目不同； 2. Mb为只有三级结构的单链蛋白质，Hb具有四个亚基组成的四级结构 3. Hb有变构效应,（1）肌红蛋白(Mb),本质：结合Pr：1条多肽链（153个aa残基）分子量：16，700功能：在肌肉中结合氧和储存氧结构：呈紧密球形，水溶性好多肽链分为8个-螺旋区：AH,（2）血红蛋白(Hb),组成：,Hb亚基之间通过8对离子键，使4个亚基紧密结合而形成亲水
7、的球状蛋白。,2:14122:1462,血红蛋白亚基间盐键示意图,Hb与Mb一样能可逆地与O2结合， Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。,（二）血红蛋白的构象变化与结合氧,Mb和Hb的氧结合曲线,Mb,Hb,Mb:矩形双曲线,Hb:“S”形曲线,* 协同效应(cooperativity),寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应。 如果是促进作用则称为正协同效应 (positive cooperativity)如果是抑制作用则称为负协同效应 (negative cooperati
8、vity),血红素与氧结合后，铁原子半径变小，就能进入卟啉环的小孔中，继而引起肽链位置的变动，使亚基间的离子键断裂，导致他们之间的聚合变得疏松。,紧张态（tense state）难与O2结合,松弛态（relaxed state）易与O2结合,*变构效应(allosteric effect),小分子化合物与蛋白质的非活性中心部位结合后，引起蛋白质空间结构的改变，并伴随其功能的变化，这种现象称为变构效应，也称别构效应。,变构蛋白(酶）：具有变构效应的Pr(酶)。 变构剂（效应剂）：凡能触发Pr或酶发生 变构效应的物质。,（三）蛋白质构象改变与疾病,蛋白质构象疾病：若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一级
9、结构不变，但蛋白质的构象发生改变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生。,蛋白质构象改变导致疾病的机理：有些蛋白质错误折叠后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病，表现为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病理改变。,这类疾病包括：人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨丁顿舞蹈病、疯牛病等。,疯牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一组人和动物神经退行性病变。正常的PrP富含-螺旋，称为PrPc。PrPc在某种未知蛋白质的作用下可转变成为富含-折叠的PrPsc，从而致病。,疯牛病 (Mad cow disease),正常朊病毒蛋白与朊病毒空间结构的差异 朊病毒本身
10、不能复制，但它却可以攻击大脑的正常朊病毒蛋白，使其发生构象改变，并与其结合，成为致病的朊病毒二聚体。此二聚体再攻击正常的朊病毒蛋白。这样，脑组织中的朊病毒不断积蓄，造成脑组织发生退行性变。,正常朊病毒蛋白结构 （显示-螺旋）,朊病毒结构（显示-折叠结构）,疯牛病简介,1985年在英国发现，因其可致牛出现异常神经系统症状，富于攻击性而取名“疯牛病”；尸检脑组织进行病理检查，发现类似于羊瘙痒病的海绵状病变，命名：牛海绵状脑病（bovine spongiform encephalopathy, BSE)疯牛病属于传染性海绵状脑病中的一种。,二、蛋白质的空间结构与功能的关系,蛋白质的空间构象是其功能活
11、性的基础！,构象在，功能在！ 构象改变，功能变化！ 构象改变引起疾病！,蛋白质结构与功能的关系 小结,结构是功能的基础,举例:牛核糖核酸酶的变性、复性实验,举例:血红蛋白的变构效应,第 四 节,蛋白质的理化性质The Physical and Chemical Characters of Protein,蛋白质的理化性质包括：,具有氨基酸性质 两性电离及等电点 紫外吸收性质 呈色反应具有生物大分子特性 胶体性质 变性作用 免疫学性质,氨基酸是两性电解质，其解离方式取决于所处溶液的酸碱度。,等电点(isoelectric point, pI) 氨基酸分子所带正、负电荷相等时，溶液的pH值称为该氨
12、基酸的等电点。,一、氨基酸和蛋白质的两性电离性质,pH=pI,pHpI,pHpI,pHpI,兼性离子,人体蛋白质，pI 5.0在人体体液pH7.4的环境下，带负电荷,二、氨基酸和蛋白质的紫外吸收性质,芳香族aa分子中有共轭双键而在 280 nm 附近有很强的紫外吸收。由于蛋白质分子中都会含有这三种氨基酸残基，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比。,应用： Pr的定量测定,三、氨基酸和蛋白质的呈色反应,氨基酸与茚三酮水合物共热，可生成蓝紫色化合物，其最大吸收峰在570nm处。,1. 茚三酮反应(ninhydrin reaction),应用：法医学上，用于采集犯罪
13、现场留下来的指纹,2. 双缩脲反应(biuret reaction)蛋白质在稀碱溶液中与硫酸铜共热，生成紫红色的蛋白质-Cu2+复合物，此反应称为双缩脲反应，这是蛋白质分子中肽键的反应，肽键越多反应颜色越深。,3. 酚试剂反应(phenol reagent reaction),在双缩脲反应的基础上，生成的蛋白质-Cu2+复合物中所含的色氨酸及酪氨酸残基与Folin-酚试剂(磷钼酸和磷钨酸化合物)反应，生产蓝色的化合物(钼蓝和钨蓝的混合物)。,反应 试剂 颜色 反应基团 反应的Pr及AA双缩脲反应 NaOH,稀CuSO4 紫或粉 2个以上肽键 所有蛋白质Millon反应 Millon,硝酸，亚硝
14、酸 红色 酚基 Tyr黄色反应 HNO3及NH3 黄、橘黄 苯基 Phe,Tyr乙醛酸反应 乙醛酸H2SO4 紫红 吲哚 Trp坂口反应 次氯酸钠,萘酚 红色 胍基 ArgFolin酚试剂反应 CuSO4磷钨酸-钼酸 兰色 酚基 Tyr 茚三酮反应 茚三酮 紫兰色 游离氨、羧基 Pro和羟Pro呈黄色,蛋白质的呈色反应,四、蛋白质的胶体性质,蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自104 至 106 D之巨，其分子的直径可达1100nm，为胶粒范围之内。,* 蛋白质胶体稳定的因素： 颗粒表面电荷 水化膜,水化膜,溶液中蛋白质的聚沉,五、蛋白质的变性与复性,在某些物理和化学因素作用下，蛋白质特定的空
15、间构象被破坏，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。,* 蛋白质的变性(denaturation),吴宪教授1931年：“天然蛋白质分子借助次级键连接而成一种紧密、有规则的空间结构，变性作用使次级键破坏从而使结构松散”。 “Studies on Denaturation of Proteins. XA Theory of Denaturation. Chinese journal of Physiology，1931，5(4)：321344”。,蛋白质研究领域内国际上最具有权威的综述性丛书Advances in Protein Chemistry第47卷（1995年）发表了美国哈佛大学教授、
16、蛋白质研究的老前辈J. T. Eddsall的文章“吴宪与第一个蛋白质变性理论（1931）Hsien Wu and the first Theory of Protein Denaturation(1931)”，对吴宪教授的学术成就给予了极高的评价。该卷还重新刊登了吴宪教授六十四年前关于蛋白质变性的论文。一篇在1931年发表的论文居然在1995年仍然值得在第一流的丛书上重新全文刊登，不能不说是国际科学界的一件极为罕见的大事。,蛋白质变性理论,造成变性的因素 1）物理因素：高温、高压、射线、振荡等 2）化学因素：强酸、强碱、重金属盐、生 物碱试剂、尿素、有机溶剂等,变性的本质, 破坏蛋白质空间结
17、构（非共价键和二硫键），不改变蛋白质的一级结构（肽键、分子组成、分子量不变）。,变性后的表现：,生物活性丧失理化性质改变, 防止变性：低温保存生物制品,应用举例, 利用变性：酒精消毒、高压灭菌, 取代变性：乳品解毒(用于急救重金属中毒),变性与复性(renaturation),变性,可逆变性：Pr变性后如将变性剂除去，该Pr分子的 天然构象和生物学活性还能恢复。,不可逆变性：若变性条件强烈，作用时间长，构象 变化大，理化性质难以恢复。,复性,在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。凡是能消除蛋白质表面的水化膜并中和电荷的试剂均可以引起蛋白质的沉淀。常用的
18、有中性盐、有机溶剂、某些生物碱试剂、某些酸类及重金属盐类等。变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。,* 蛋白质沉淀,蛋白质的沉淀反应,中性盐沉淀反应,* 盐析(salt precipitation) 将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。,*丙酮沉淀：必须在04低温下进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。其原理是降低介电常数和破坏蛋白质的水化层,有机溶剂沉淀反应,生物碱试剂沉淀反应,重金属盐沉淀反应：,* 重金属盐中毒的抢救机理,蛋白质变性后的絮状物加热
19、可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。,凝固是蛋白质变性后进一步发展的不可逆的结果。所以凝固的蛋白质一定变性、沉淀。,* 蛋白质的凝固作用(protein coagulation),第五节,蛋白质的分离和纯化 The Separation and Purification of Protein,分离纯化蛋白质的一般程序,材料的预处理及细胞破碎,通常选择适当的缓冲液抽提蛋白质,蛋白质粗制品的获得,进一步分离纯化获得蛋白纯品,* 蛋白质的分离和纯化主要依据以下几个性质： 分子大小 溶解度 电荷 吸附性质 免疫性等。,蛋白质的理化性质与常用的分离纯化方法,一、超速离心(ultracen
20、trifugation),*利用机械的快速旋转所产生的离心力，将不同的物质进行分离,*蛋白质在离心场中的行为用沉降系数(sedimentation coefficient, S)表示。因为沉降系数S大体上和分子量成正比关系，故应用超速离心法既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。,盐析法 有机溶剂沉淀法,二、沉淀（precipitation）,盐析法,定 义：加入大量中性盐以破坏Pr的稳定因素并 使从溶液中沉淀析出的现象。原 理: 破坏Pr两个稳定因素：水化膜和电荷层中性盐：(NH4)2SO4；Na2SO4；NaCl等优 点：Pr不变性，常用,试剂： 丙酮、乙醇、甲醇等亲水溶剂原
21、理： 与H2O结合，破坏水化层优点：分辨率优于盐析法，能使某一Pr在狭小有机溶剂 浓度范围内沉淀。缺点：易使Pr变性应用：pI沉淀Pr。调节溶液pH到某Pr的pI，加上丙酮 破坏水化膜，Pr沉淀。注意：防止Pr在分离过程中发生变性：04 下进行； 有机溶剂浓度不能太高，Pr沉淀后立即分离,有机溶剂沉淀法,* 免疫沉淀法：将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。,免疫沉淀法：,三、透析及超滤法,* 透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。,人工肾,血液透析
22、图,四 、层析法,层析(chromatography)分离蛋白质的原理待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。,组分A组分B,固定相,吸附结合等,解除上述作用,层析的基本过程,蛋白质分离常用的层析方法* 凝胶过滤(gel filtration)又称分子筛层析，利用各蛋白质分子大小不同分离。* 离子交换层析(ion exchange chromatography)：利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。*亲和层析(affinity chrom
23、atography)：利用蛋白质与固定相特异性结合进行分离,凝胶过滤,大分子先洗脱下来小分子后洗脱下来,离子交换层析,洗脱曲线,亲和层析,四、 电泳（electrophoresis ）,定义：带电粒子在电场中向着与其电性相反的电极移动的现象。,Pr分子在溶液中可带净的负电荷或带净的正电荷，故可在电场中发生移动。不同的蛋白质分子所带电荷量不同，且分子大小也不同，故在电场中的泳动速度也不同，由此可彼此分离。,几种重要的蛋白质电泳*SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE) 常用于蛋白质分子量的测定。*等电聚焦电泳(isoelectric focusing electrophoresis) 通过
24、蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。*二维电泳（two-dimensional electrophoresis） 蛋白质组学研究的重要技术。,（一）SDS-PAGE,（二）等电聚焦电泳（IEF）,等电聚胶电泳,（三）二维电泳（2D electrophoresis）,IEF,SDS-PAGE,双向电泳（two dimensional electrophoresis）,原点,带负电荷蛋白质的泳动方向,滤纸、醋酸纤维素薄膜或其他支持物,阳极,阴极,电极缓冲液,电极缓冲液,蛋白质的分离纯化：小结,1、透析、超滤 根据性质：分子大小2、盐析 根据性质：蛋白质的沉淀 作用机理：中性盐中和表面电荷，破
25、坏水化层 影响因素：表面电荷、水化层、溶剂性质,3、电泳： 根据性质：蛋白质的两性解离 作用机理：异性电荷互相吸引 影响因素：电荷种类及数量、分子大小及形状 溶液离子强度及pH等,4、层析（1）离子交换层析：电荷、分子量、分子形状（2）亲和层析：生物特性（3）吸附层析：吸附特性（4）凝胶过滤层析（分子筛）： 分子大小及形状大分子先洗脱下来,5、超速离心：分子大小及形状、溶液特性,第六节蛋白质的序列分析和结构分析,Sequence Analysis and Structural Analysis of Protein,蛋白质研究内容,氨基酸组分分析 氨基酸序列分析 蛋白质空间结构分析 蛋白质组学
26、,一、蛋白质的氨基酸组分分析,步骤：水解衍生层析（离子交换）定量,分析残基组成,Edman降解法,二、蛋白质的氨基酸序列分析,H2N,COOH,Edman降解法,多肽链氨基酸序列的测定,分析已纯化蛋白质的氨基酸残基组成,测定多肽链的氨基末端与羧基末端为何种氨基酸残基,把肽链水解成片段，分别进行分析,测定各肽段的氨基酸排列顺序，一般采用Edman降解法,一般需用数种水解法，并分析出各肽段中的氨基酸顺序，然后经过组合排列对比，最终得出完整肽链中氨基酸顺序的结果。,丹酰氯法检测多肽链N-端示意图,丹酰氨基酸（强荧光）,3. 多肽的水解和肽段的测序：两种水解法，Edman降解法,4. 多肽段的组合叠加
27、：,H-甘-丙-丙-苏-蛋-组-酪-苯-精-甘-丙-丝-蛋-丙-亮-异-赖-苯-甘-亮-蛋-丙-缬-丝-精-亮-甘-丙-天-OH,两种水解作用所得肽链的测序与组合,（二）通过核酸来推演蛋白质中的氨基酸序列,按照三联密码的原则推演出氨基酸的序列,分离编码蛋白质的基因,测定DNA序列,排列出mRNA序列,三、蛋白质的空间结构分析,二级结构测定通常采用圆二色光谱(circular dichroism，CD)测定溶液状态下的蛋白质二级结构含量。-螺旋的CD峰有222nm处的负峰、208nm处的负峰和198 nm处的正峰三个成分；而-折叠的CD谱不很固定。,三级结构测定X射线衍射法(X-ray diff
28、raction)和核磁共振技术(nuclear magnetic resonance, NMR)是研究蛋白质三维空间结构最准确的方法。,肌红蛋白结晶的X线衍射图 John Kendrew对抹香鲸肌红蛋白结晶进行了X线衍射分析，其衍射图中包含了25 000个衍射光点。衍射图谱中光点的强度和光点的分布类型提供出蛋白质结构的足够信息。根据这些衍射光点的密度与分布，通过计算机分析，绘出其三维电子密度分布图，进而得出空间结构图形。,肌红蛋白结晶的衍射结果,同源模建 将待研究的序列与已知结构的同源蛋白质序列对齐补偿氨基酸替补、插入和缺失通过模建和能量优化计算，产生目标序列三维结构。序列相似性越高，预测的模
29、型也越准确。折叠识别 通过预测二级结构、预测折叠方式和参考其它蛋白的空间结构，从而产生目标序列的三维结构。从无到有 根据单个氨基酸形成二级结构的倾向，加上各种作用力力场信息，直接产生目标序列三维结构。,根据蛋白质的氨基酸序列预测其三维空间结构：,四、蛋白质组学,（一）蛋白质组学基本概念,蛋白质组是指一种细胞或一种生物所表达的全部蛋白质，即“一种基因组所表达的全套蛋白质”。,蛋白质组研究内容,（1）蛋白质表达谱（2）蛋白质翻译后修饰（3）细胞定位（4）蛋白质相互作用（5）蛋白质生物信息学研究（6）蛋白质结构解析,（二）蛋白质组学研究技术平台,蛋白质组学是高通量，高效率的研究:,双向电泳分离样品蛋
30、白质 蛋白质点的定位、切取 蛋白质点的质谱分析,（三）蛋白质组学研究的科学意义,小 结,掌握1.蛋白质的元素组成特点，氨基酸的结构通式、氨基酸的分类、三字英文缩写符号。2.蛋白质一、二、三、四级结构的概念及其主要的化学键。3.蛋白质二级结构的形式及-螺旋，-折叠的结构特点 4.蛋白质的结构与功能的关系。5.蛋白质的理化性质：两性电离，胶体性质，蛋白质变性的概念和意义，紫外吸收和呈色反应。,熟悉肽、肽键与肽链的概念，多肽链的写法。生物活性肽的概念。肽单元概念、模体、分子伴侣的概念。结构域的概念。蛋白质的分类。蛋白质的沉淀，等电点沉淀，凝胶过滤，超过滤和超速离心。蛋白质分离和纯化技术：盐析、电泳和
31、分子筛的原理。,1、重要名词：氨基酸残基 变构效应 等电点 蛋白质的变性 分子伴侣 模体 锌指结构 结构域 分子病 亚基 2、结构层次元素组成：C、H、O、N（16%）、S结构单位：20种L-氨基酸一级结构：肽键；多肽链N端C端二级结构：稳定力（氢键）；类型（螺旋，折叠，转角，无规卷曲）三级结构四级结构3、结构与功能关系（举例）4、重要性质：等电点及带电状态判定；胶体性质；紫外吸收；变性5、分离纯化：透析；盐析；丙酮沉淀；电泳；离子交换层析；分子筛,本章小结,1.试述蛋白质螺旋、折叠的结构特点。2.试比较蛋白质的一、二、三、四级结构及维持其稳定的化学键 。3.试举例说明蛋白质（一级/高级）结构
32、与功能的关系。4.试区别蛋白质的变性和变构。5.蛋白质定量测定的方法有哪些？,问答题,蛋白质含量测定法,微量凯氏定氮法：双缩脲法：样品量0.2-1.7mg/L改良Lowry法 在碱性条件下磷钼酸、磷钨酸混合试剂与酪氨酸上的酚发生应，生成蓝色化合物，将其与双缩脲法结合起来，形成两种颜色的混合物，在650nm具有特定的吸收。灵敏度较高25g-250g/ml.,考马斯亮蓝法（Bradford法） 考马斯亮蓝G250是一种带有负电荷的染料，在酸性条件下可与Pr上的正电荷结合，形成蓝色化合物，在595nm具有特定吸收。,紫外吸收法 由于核酸在260nm具有光吸收，对测定干扰较大，可采用280nm、260
33、nm同测法。 蛋白质浓度mg/ml1.45A280-0.74A260,1 天然蛋白质中不存在的氨基酸是 A蛋氨酸B胱氨酸C羟脯氨酸D同型半胱氨酸E精氨酸,2 下列哪种氨基酸在肽链中形成拐角A缬氨酸B酪氨酸C脯氨酸D苏氨酸E色氨酸,3 下列有关蛋白质折叠结构的叙述正确的是 A.主链骨架呈锯齿状 B.两个相邻的肽平面呈折纸状 C.折叠结构是一种较伸展的肽链结构 D.若干矩齿状肽链骨架平行或反平行排列，链间靠氢键维系 E.以上都正确,4. 有关血红蛋白(Hb)和肌红蛋白(Mb)的叙述不正确的是 A.都可以和氧结合 B.Hb和Mb都含铁 C.都是含辅基的结合蛋白 D.都具有四级结构形式 E.都属于色蛋白类5 有一血清清蛋白(pI6.85)的混合物，在哪种条件下电泳分 离效果最好? A.pH4.9 B.pH5.9 C.pH6.5 D.pH8.6 E.pH3.5,
